Ddx3基因在不同日龄小鼠睾丸组织中的表达

目的:观察小鼠睾丸初次生精过程中的发育特点;检测Ddx3基因与蛋白在小鼠睾丸生精过程中的表达模式;探讨Ddx3基因对小鼠睾丸生精的影响。方法:采用HE染色与PAS染色的方法观察不同日龄小鼠睾丸组织的石蜡切片;用荧光实时定量PCR的方法检测Ddx3 mRNA在小鼠睾丸精子发生过程中的表达;采用免疫组织化学和Western blot方法检测DDX3蛋白在小鼠睾丸初次生精过程中的表达特点和细胞内定位。结果:HE染色结果显示4、13、21、35、42和60日龄是小鼠睾丸发生初次生精过程的特定阶段;荧光实时定量PCR结果显示Ddx3 mRNA在4日龄以后小鼠睾丸组织中均有表达,于35日龄开始明显增高,随后表达水平保持稳定;Western blot显示DDX3蛋白在35、42和60日龄小鼠睾丸生精小管中出现特异性表达并逐渐增高;免疫组织化学法显示DDX3蛋白主要在初级精母细胞和精子细胞的细胞质和细胞核中表达。结论:DDX3蛋白在小鼠初次精子发生过程中呈现特异性表达,提示Ddx3基因可能在精母细胞与精子细胞的发育中发挥作用。     

DNAJB8在小鼠睾丸生殖细胞中的表达定位

目的：探究DNAJB8［DnaJ heat shock protein family（HSP40） member B8］在小鼠精子发生过程中的表达模式。方法：分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测小鼠各脏器、不同发育时期睾丸组织以及不同生精细胞DNAJB8的mRNA转录和蛋白表达量;免疫荧光检测DNAJB8在生精细胞中的表达定位。结果：DNAJB8基因在睾丸组织中特异表达,从小鼠出生后21 d（P21）即圆形精子阶段开始DNAJB8 mRNA保持较高的表达,而DNAJB8蛋白在精子变形晚期出生后35 d（P35）才开始表达。DNAJB8蛋白主要定位在晚期精子细胞及精子鞭毛中段。结论：DNAJB8可能参与小鼠精子变形晚期的发育过程。     

原位杂交法检测不同发育阶段小鼠睾丸中TERT mRNA的表达

本实验应用原位杂交方法检测出生后 10d～ 90d雄性小鼠睾丸中TERTmRNA表达及定位。原位杂交方法 (Insituhybridization)结果显示 :① 10d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮中尚无TERTmRNA阳性表达 ;② 2 0d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见TERTmRNA阳性表达 ,阳性表达位于初级精母细胞 ;③ 30d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮也可见TERTmRNA阳性表达 ,初级精母细胞表现强阳性表达 ;④ 6 0d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见明显TERTmRNA阳性表达 ,阳性表达位于初级精母细胞及精子细胞 ;⑤ 90d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮有较强烈的TERTmRNA阳性表达 ,阳性表达位于初级精母细胞。此结果提示我们 :端粒酶在精子发生过程中存在动态变化 ,端粒酶的表达与精子发生存在密切关系。     

原位杂交法检测不同发育阶段小鼠睾丸中TERT mRNA的表达

本实验应用原位杂交方法检测出生后10 d～90 d雄性小鼠睾丸中TERT mRNA表达及定位.原位杂交方法(In situ hybridization)结果显示:①10 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮中尚无TERT mRNA阳性表达;②20 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞;③30 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮也可见TERT mRNA阳性表达,初级精母细胞表现强阳性表达;④60 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见明显TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞及精子细胞;⑤90 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮有较强烈的TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞.此结果提示我们:端粒酶在精子发生过程中存在动态变化,端粒酶的表达与精子发生存在密切关系.     

钙网蛋白calreticulin在小鼠睾丸中的表达及意义

目的:研究钙网蛋白(calreticulin,CRT)在成年小鼠睾丸组织中的表达及分布,探讨CRT在小鼠睾丸发育及其精子发生过程的功能?方法:运用免疫印迹法和免疫组织化学术,检测CRT在小鼠睾丸组织中的表达和分布?结果:免疫印记法证实CRT在成年小鼠睾丸高表达,同时免疫组织化学显示阳性信号主要集中在小鼠睾丸精原细胞和间质细胞?结论:CRT在小鼠睾丸中的定位提示其可能与精原细胞更新和分化以及雄激素分泌密切相关?     

生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究

目的：应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究。方法：用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况。结果：小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的。小鼠出生6 d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18 d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部。结论：Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用。     

PDCD4在雄鼠生殖细胞中的表达研究

目的：验证程序性细胞死亡因子4 (programmed cell death 4,PDCD4)在小鼠雄性生殖细胞中的表达。方法：RT-PCR检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸的基因表达情况;Western blot法检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸中蛋白表达水平;免疫荧光法检测PDCD4在雄性生殖嵴以及在不同周龄小鼠睾丸的定位情况。结果：RT-PCR和Western blot结果均显示PDCD4在0周龄小鼠睾丸中开始有表达,并持续表达至成年;免疫荧光显示PDCD4在胚胎期雄性小鼠生殖细胞中也有表达;在出生后0周和1周龄小鼠睾丸中,PDCD4特异表达于精原细胞;在2周龄小鼠睾丸中,PDCD4分布于精原细胞和精母细胞;而在3、4和5周龄小鼠睾丸组织中,PDCD4主要分布于精原细胞、精母细胞与圆形精子细胞。结论：PDCD4分布于胚胎期和出生后各阶段生精细胞,这为进一步研究PDCD4在精子发生中的作用打下基础。     

减数分裂特异基因sycp_1在小鼠精母细胞中的表达

目的 检测减数分裂基因sycp1在小鼠精子发生过程中的特异表达及其蛋白产物在小鼠精母细胞中的定位.方法 利用半定量RT-PCR技术分析了sycp1基因在1,2,3,5,8周龄小鼠睾丸发育过程中的阶段特异性表达,以及脑、心脏、肺、肝脏、肾脏、脾、胸腺和睾丸中的组织特异性表达;采用免疫组织化学染色方法检测了SYCP1在小鼠曲细精管中的细胞定位;通过间接免疫荧光染色初步显示了SYCP1在粗线期精母细胞中的分布.结果 RT-PCR分析证实sycp1 mRNA具有明显的组织特异性和阶段特异性表达特征;免疫组织化学染色结果显示,SYCP1只存在于减数分裂期的精母细胞核内;间接免疫荧光分析表明SYCP1在粗线期精母细胞核内的分布与核染色体的分布相一致.结论 SyCp1为减数分裂特异基因,其编码蛋白在雄性小鼠精母细胞核内的表达与SC的形成和成熟同步,参与了同源染色体之间的联会和重组.     

X线辐射对成年小鼠睾丸ghrelin表达的影响

目的:探讨ghrelin在X射线全身照射后小鼠睾丸中表达及其意义。方法:采用辐射剂量1.0GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16h、4w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测ghrelin的表达及变化。结果:正常小鼠睾丸ghrelin的阳性表达主要集中在间质细胞,生精细胞呈阴性反应,照射后ghrelin间质细胞为阴性,而生精细胞中出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,但照射后4w组中的精子细胞中未见阳性反应。结论:ghrelin在X线辐射后小鼠睾丸中表达的变化,表明ghrelin参与了小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程。     

Survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系

目的: 探讨新的凋亡相关基因survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系. 方法: 间隔24 d两次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型,第2次给药后随机分为1,2,3,4,6,8,10 wk 7组,于相应时间点及给药前取材,采用免疫组化S-P法和透射电镜、DNA原位末端标记TUNEL法分别检测survivin蛋白的表达和细胞凋亡. 结果: Survivin蛋白主要表达于间质细胞、次级精母细胞和精子细胞,生殖细胞的凋亡主要发生于初级精母细胞和圆头精子细胞. Survivin蛋白的表达与生殖细胞凋亡指数(AI)呈负相关(r=-0.784,P<0.01). 结论: Survivin蛋白表达而引起的凋亡抑制,有利于生殖细胞凋亡稳态的维持,对正常的精子发生起重要作用.     

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶SRPK2在小鼠睾丸组织中的表达及意义

【摘要】 目的 通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2（serine/arginine-rich protein specific kinase 2，SRPK2） 基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征，探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。 方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹杂交（Western blotting）分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达；利用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达；应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。 结果 半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达；实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达，具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核；间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。 结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达，并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位，极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程，其作用机制值得进一步深入研究。     

亚慢性苯吸入暴露抑制小鼠单倍体精子核蛋白基因的表达

目的：探讨苯对小鼠精子生成损伤的主要阶段。方法：6～8周龄C57BL/6J雄性小鼠,按体质量随机分为3组,对照组、1 ppm和100 ppm苯暴露组,模拟职业暴露情况,实施每天8 h,每周5 d,共13周的亚慢性动式吸入染毒。HE染色观察睾丸组织病理学改变。选取精子发生中阶段特异性表达基因作为不同阶段精子的marker,选定的marker基因有代表未分化型精原细胞的Plzf,分化型精原细胞的Stra8,初级精母细胞的Sycp3,圆形精子的过渡蛋白Tnp1、Tnp2,长形精子的Akap4,以及鱼精蛋白Prm1、Prm2,采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测marker基因mRNA表达。结果：苯暴露组小鼠睾丸组织呈现嗜酸性染色增强,1 ppm组出现少量核溶解、细胞脱落等改变;100 ppm组小鼠睾丸生殖细胞变性、坏死明显增多,管腔中心无（或少）细胞的曲细精管数量明显增多,表明亚慢性苯暴露可引起小鼠睾丸的病理改变。苯暴露组Plzf、Stra8、Sycp3、Akap4 的mRNA表达均未显示统计学差别,而1 ppm组鱼精蛋白Prm2的mRNA表达显著降低（P＜0.01）;100 ppm组过渡蛋白Tnp1、Tnp2,鱼精蛋白Prm1、Prm2的mRNA表达均显著降低（P＜0.05）。结论：亚慢性苯吸入暴露可导致小鼠睾丸组织的病理改变,下调Tnps和Prms mRNA表达,主要影响单倍体精子细胞核内组蛋白被鱼精蛋白取代的过程。     

小鼠Boule蛋白与Crem3′UTR结合并调节其表达

目的研究小鼠Boule蛋白与精子成熟相关基因Crem之间的相互作用,揭示Boule蛋白在精子发生过程中所起的作用。方法构建pGEX-Boule表达载体,将表达载体转化宿主菌(BL21)感受态细胞,诱导纯化出Boule蛋白,应用RT-PCR和凝胶滞后实验(EMSA)分析与Boule蛋白结合的mRNA。结果表达载体pGEX-Boule构建成功,纯化出GST-Boule融合蛋白,RT-PCR和EMSA实验证明Boule蛋白能够结合Crem3′UTR。结论 Boule蛋白能够结合Crem3′UTR,可能通过调控Crem蛋白的表达作用于精子发生过程。     

大鼠睾丸AQP7 mRNA与蛋白质的表达及定位研究

目的:探讨AQP7在大鼠睾丸的基因与蛋白质表达及定位.方法:取4周和12周Wistar大鼠睾丸,采用RT-PCR、Westernblot检测AQP7 mRNA和蛋白质表达,免疫组化检测进行其定位研究.结果:大鼠睾丸有AQP7 mRNA和蛋白质表达,定位于减数分裂后的精子细胞和精子膜上,管周细胞也有AQP7的阳性染色.结论:AQP7在睾丸的表达可能与精子发育及曲细精管的功能有着密切的关系.     

男性不育症患者睾丸组织中端粒酶RNA表达状况的研究

目的 为探讨人端粒酶RNA（hTR)基因在男性不育症患者睾丸组织中的表达及其意义。方法 应用核酸原位杂交技术对47例男性不育症患者睾丸组织和10例正常睾丸组织中端粒酶hTR基因的表达进行检测和定位，并应用HPIAS-1000高清晰度图像处理系统对hTR阳性信号进行图像分析，结果 端粒酶hTR基因阳性表达与生殖细胞（精原细胞、精母细胞、精子细胞）的分布定位一致，在精细胞不发育（唯Sertoli细胞综合征）患者睾丸组织中无端粒酶hTR基因的表达。结论 提示端粒酶活性的缺乏可能是生殖细胞发育停滞的原因，但不是唯一的原因。可能还有端粒酶以外的因素起作用，对端粒酶研究有助于了解它在男性生殖中的作用，并为男性不育症在端粒酶途径的基因治疗提供理论和实验依据。     

p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达

目的：探讨p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达．方法：应用免疫组织化学SABC法检测1～7周龄小鼠睾丸p38MAPK的表达和定位．结果：在2周龄小鼠睾丸生精小管上皮中即可观察到p38MAPK免疫阳性反应，免疫反应阳性细胞为精原细胞；3，4和5周龄小鼠睾丸仅有个别生精小管上皮可见p38 MAPK免疫阳性反应；6，7周龄小鼠睾丸中p38 MAPK表达较丰富，免疫反应阳性细胞为精原细胞和初级精母细胞，免疫阳性反应物均主要位于细胞核内．在7周龄小鼠睾丸中还可见到部分间质细胞呈p38 MAPK阳性，免疫阳性反应物主要位于细胞质内．结论：p38 MAPK可能对生精细胞的增殖分化以及雄激素的分泌具有调控作用。     

受体相互作用相关蛋白140在正常小鼠脑发育过程中的表达

目的了解受体相互作用相关蛋白（RIP）140在正常小鼠脑发育时期的表达情况。方法应用免疫组化方法研究RIP140在脑组织中的定位,并应用实时定量PCR和Western印迹研究RIP140在正常小鼠不同发育时期的动态表达模式。结果免疫组化结果显示RIP140在正常小鼠脑发育过程中始终存在表达,且在大脑皮质、海马、丘脑等部位有明确的表达。实时定量PCR结果显示RIP140 mRNA在正常小鼠脑不同发育时期的表达呈现动态变化模式,Western印迹结果示RIP140蛋白在小鼠脑不同发育时期的表达也呈现动态变化模式,且与mRNA的表达具有正相关性（rs=0．767,P=0．016〈双侧〉）。结论RIP140参与了正常小鼠脑发育和脑功能的行使。     

Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及其意义

目的探讨Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及意义。方法采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对正常足月妊娠妇女(对照组)30例、晚发型重度子痫前期30例及早发型重度子痫前期30例的Rho-GDI mRNA及蛋白进行测定。结果 Rho-GDI主要表达于蜕膜细胞的胞浆、胞核和少许间质。荧光实时定量PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证结果显示Rho-GDI mRNA及蛋白在正常妊娠组蜕膜组织中表达最高;早发型子痫前期组中次之;晚发型子痫前期中最低。正常组与早发组和晚发组比较,差异均有显著性(P<0.05),但早发组与晚发组间比较的差异无显著性(P>0.05)。结论 Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中表达下调,Rho-GDI可能通过调控滋养细胞浸润和血管平滑肌舒缩状态等环节参与了子痫前期的发生发展。     

Expression of Telomerase Gene mTR in the Testis of SD Rats and Its Significance

Summary:To study the expression of mTR gene in the testis of SD rats with varied ages and its sig-nificance,in situ hybridization(ISH)techniques were applied to detect the expression of telomerasegene mTR mRNA in the testis of SD rats.The expression of mTR was found in testes of different-age male SD rats.There was a positive correlation between the expression of mTR and the location ofgerm cells(spermatogonia,spermatocyte,spermatid).In Setoli cells,leydig cell and spermatozoa,no telomerase mTR was detectable.Type A spermatogonia expressed the highest level of telomerasemTR mRNA.It was suggested that the expression of mTR gene in the testis of SD rats is of lifetimeand coincides with the telomerase activity.