ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究

目的:探讨MAPK/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。初步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌细胞SKOV3,采用CCK-8细胞增殖方法检测卵巢癌细胞SKOV3增殖情况,Western blot检测p-ERK蛋白表达,Transwell细胞侵袭实验检测SKOV3细胞的侵袭能力。结果:CCK-8法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059有效浓度为25μmol/L,在此有效浓度作用下有效时间为24h;Western blot法检测结果显示PD98059能够下调pERK1/2,即抑制ERK1/2磷酸化,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;Transwell细胞侵袭实验结果显示PD98059在一定浓度范围内能抑制卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与转移能力。结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭转移。     

PD98059对体外CCl4刺激的肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原纤维表达的影响

目的 探讨特异性MEK抑制剂PD98059对体外肝星状细胞增殖及I型胶原纤维表达的影响.方法 将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃、5％CO2孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:对照组、CCl4组、CCl4+不同剂量PD98059(20、50、100 μmol/L),用透射电镜观察细胞超微结构,MTT比色法检测细胞增殖情况及免疫细胞化学法测定Ⅰ型胶原纤维表达.结果 透射电子显微镜可见PD98059组比CCl4组凋亡细胞显著增多,细胞数目减少;CCl4刺激HSC后,细胞明显增殖(P＜0.05),各剂量组PD98059对细胞增殖均有抑制作用(P＜0.05),抑制率分别为21.84％、38.27％、46.65％;CCl4组HSC中的Ⅰ型胶原表达与对照组比较显著增加(P＜0.05),PD98059明显抑制Ⅰ型胶原表达(P＜0.05).结论 PD98059对CCl4刺激HSC增殖及Ⅰ型胶原的表达具有抑制作用.     

PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中协同作用及机制

目的初步探讨PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中的协同作用。方法采用不同浓度的PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路抑制剂rapamycin与PD98059分别单独及联合作用于胃癌细胞SGC-7901。采用CCK8法检测SGC-7901细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测关键基因m RNA的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化。结果 Rapamycin(12.5、25、50、100、150、200 nmol/L)与PD98059(25、50、100、200、300、400μmol/L)单独作用可抑制SGC-7901细胞增殖活性,联合作用也可抑制其活性,且联合组的抑制作用强于单独作用(P0.05)。与rapamycin、PD98059单独作用相比,联合组对AKT、m TOR、MEK、ERK基因m RNA表达和p-AKT、p-m TOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的抑制作用明显增强(P0.05)。联合组阻滞于G0/G1期的细胞比例显著增多,且具有更强的促凋亡作用。结论 PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中具有一定的协同调控作用。     

大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK-1/2信号传导通路激活AP-1

目的 探讨大鼠胃黏膜细胞EGFR活化AP—1的信号传导通路。方法 用EGFR配体TGF—α刺激分离的大鼠胃黏膜细胞。Western blot和EMSA方法检测ERK—1／2信号传导通路的活化程度。结果 1nmol／L TGF—α刺激胃黏膜细胞30min不仅显著诱导AP—1的活性，而且明显激活MEK和ERK—1／2；EGFR特异性抑制剂PD153035或MEK特异性抑制剂PD98059能完全阻断TGF—α诱导的胃黏膜细胞AP—1活化。结论 大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK—1／2信号传导通路激活AP—1。     

PD98059对离体四氯化碳刺激肝星状细胞周期和细胞内Ca2+浓度影响

目的 探讨特异性有丝分裂原活化蛋白激酶抑制剂PD98059对离体四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)周期和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 HSC常规复苏传代培养,同步化后分为空白对照组、CCl4组和CCl4+PD98059(100 μmol/L)组.检测细胞周期以反映细胞增殖情况,用钙离子荧光探针进行荧光染料负载,用激光扫描共聚焦显微镜测定[Ca2+]i.结果 流式细胞结果可见CCl4刺激HSC后,S/G2期细胞增多,G1期细胞减少(P＜0.05),PD98059对这一过程有抑制作用(P＜0.05);激光扫描共聚焦显微镜检测可见CCl4组的[Ca2+]i较空白对照组增强(P＜0.05),CCl4+PD98059组细胞内[Ca2+]i降低(P＜0.05).结论 PD98059可以降低CCl4刺激的HSC中[Ca2+]i,对细胞从静止期进入活动期有抑制作用.     

细胞外信号调节激酶通路对二氧化硅活化的肺成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路对经SiO2活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)条件上清刺激的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖的影响.方法 将矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的AM体外再次染尘,取其上清与HELF共同孵育,用特异性阻断剂PD98059进行干预,实验分为空白对照组、AM对照组、SiO2处理组、PD98059干预组,通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术法及免疫印迹(Western blot)法观察成纤维细胞细胞增殖活性及p-ERK1/2蛋白表达情况.结果　SiO2处理组及AM对照组细胞增殖的吸光度(A值)增高,分别是空白对照组的2.6和2.0倍,差异有统计学意义(P＜0.05).25和50 μmol/L PD98059组HELF细胞增殖的A值分别是SiO2处理组的72.1%和48.5%,差异有统计学意义(P＜0.05).经SiO2粉尘刺激的AM培养上清作用于HELF后,p-ERK1/2表达明显上调,15min时已有表达,30min时活化明显,表达最强(A值为0.4653±0.0265),60min后仍处于较高的状态而表达有所减弱.除15 min外,SiO2处理组各时间点ERK1/2的蛋白表达分别是同期AM对照组的1.25、1.23、1.25倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 加尘AM培养上清可能通过ERK1/2信号途径促进HELF的增殖及ERK1/2的活化,而参与矽肺的发生发展.     

ERK信号通路在紫杉醇诱导大肠癌细胞凋亡中的作用

目的 观察紫杉醇对大肠癌细胞系CX1细胞的杀伤作用,并探讨MAPKs/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对其的影响.方法 通过MTT法比较紫杉醇和紫杉醇+PD98059分别作用于CX1细胞后的药物敏感度,并应用流式细胞术对二者作用下的细胞进行细胞解析,观察细胞周期变化.结果 大肠癌CX1细胞在紫杉醇作用72 h后,IC50为2.14 × 10-7mol/L,而在紫杉醇联合PD98059作用72 h后,IC50为6.91×10-9mol/L.通过细胞的周期解析发现紫杉醇和PD98059共同作用的细胞其凋亡比例为31.41%,远远高于紫杉醇单独作用引起的凋亡(15.60%),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05).而未加药及单加PD98059的CX1细胞其凋亡细胞只占5.27%及5.61%,二者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 紫杉醇可以诱导大肠癌细胞凋亡,而针对MAPK/ERK信号通路的抑制剂PD98059可增强紫杉醇的凋亡作用.     

ERK及AP-1对二氧化硅上调人肺上皮细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1表达的作用

目的 探讨细胞外信号调控激酶(ERK)/激活蛋白(AP-1)信号通路在二氧化硅诱导人肺上皮细胞(A549)纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达中的作用.方法 以人肺上皮细胞A549为研究对象,200 μg/ml二氧化硅刺激0-24h.干预实验采用姜黄素预处理以及c-Jun显性负性突变体(TAM67)瞬时转染阻断AP-1活性;PD98059预处理阻断ERK活性.以Western印迹检测ERK激酶活力、PAI-1蛋白表达,EMSA检测AP-I DNA结合活性.结果 (1)SiO2作用A549细胞4、8、16 h,AP-1DNA结合活性分别为对照的1.3、1.3、2.1倍,差异有统计学意义(P＜0.05);10、25、50μmol/L浓度姜黄素对二氧化硅诱导的PAI.1蛋白表达抑制率分别为20%、63%、65%,差异有统计学意义(P＜0.05);TAM-67对二氧化硅诱导的PAI.1蛋白表达的抑制率为59%,与二氧化硅刺激组比,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)二氧化硅作用A549细胞诱导ERK激酶活化;PD98059对二氧化硅诱导的PAI-1蛋白表达的抑制率为51%,与二氧化硅刺激组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)PD98059对二氧化硅诱导的AP-1 DNA结合活性的抑制率为73%,与二氧化硅刺激组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERK/AP-1信号通路参与调控SiO2诱导的人肺上皮细胞PAl-1蛋白表达.     

青石棉诱导呼吸道上皮BEAS-2B细胞表达白细胞介素-8的研究

目的研究青石棉纤维作用于呼吸道上皮BEAS-2B细胞后白细胞介素-8(IL-8)蛋白和基因的表达水平及酪氨酸激酶抑制剂PD98059对IL-8表达的影响。方法用定量聚合酶链反应法测定青石棉纤维诱导BEAS-2B细胞后的IL-8mRNA水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BEAS-2B细胞培养上清液中IL-8蛋白水平。结果不同浓度青石棉刺激BEAS-2B细胞后,细胞培养上清液中IL-8释放量明显增加,同样BEAS-2B细胞中IL-8mRNA表达显著上升,使用酪氨酸激酶抑制剂PD98059可明显抑制IL-8的蛋白及mRNA表达水平。结论青石棉可诱导IL-8的高表达,而这种表达可为PD98059所抑制,提示IL-8的表达受丝裂原活化蛋白激酶信号通路中磷酸化ERK蛋白表达的控制。     

IGFBP-rP1通过调控MEK/ERK信号通路对抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖的影响及机制探讨

目的:探讨外源性胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1 (IGFBP-rP1)联合MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响及其机制.方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞,向培养基中添加不同浓度人重组胰岛素生长因子结合蛋白相关蛋白1 (rhIGFBP-rP1)和PD98059,上调IGFBP-rP1的水平,采用Cell CountingKit-8(CCK-8)法检测不同浓度rhIGFBP-P1及rhIGFBP-P1联合MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059对HEC-1A细胞增殖的影响,并用蛋白免疫印迹(western blot)法分析不同浓度rhIGFBP-rP1作用下子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞总的ERK1/2和磷酸化ERK1/2水平变化.结果:添加rhIGFBP-rP1子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖受到明显抑制,其抑制作用呈浓度和时间依赖性(P＜0.05);4ag/ml rIGFBP-rP1对HEC-1A增殖抑制作用随着时间延长越来越明显,12、24、48、72 h增殖抑制率比较差异有统计学意义(P＜0.05).而MEK/ERK通路抑制剂PD98059能增强其抑制作用,rIGFBP-rP1(4μg/ml)与PD98059(25 μmol/L)联用,以上各时间点细胞增殖抑制率分别增至(10.04±2.71)％、(17.02±1.58)％、(28.59±2.04)％、(35.29±1.12)％,各组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot示添加rhIGFBP-rP1,磷酸化的ERK1/2水平显著降低,磷酸化的ERK1/2水平与rhIGFBP-rP1呈剂量依赖性.结论:IGFBP-rP1可以通过MEK/ERK信号通路抑制细胞增殖.     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

Correlates of stages of change of smoking among inhabitants of deprived neighbourhoods

BACKGROUND: This study examines the prevalence and correlates of stages of change of smoking, in terms of psychosocial, structural and sociodemographic factors, among inhabitants of deprived neighbourhoods. METHODS: Cross-sectional data were obtained from a survey on health related behaviour. Subjects were 2009 current and former smokers, aged 20-46, living in deprived neighbourhoods in Rotterdam, the second largest city in the Netherlands. Three groups of smokers were formed according to the stages of change-definitions of the Transtheoretical Model: smokers not planning to quit (precontemplators), smokers planning to quit (contemplators/preparators) and former smokers (actors/maintainers). Smokers planning to quit and smokers not planning to quit were compared regarding psychosocial factors (attitude, social norm, self-efficacy), structural factors (neighbourhood problems, material deprivation, financial problems, employment status) and sociodemographic factors (age, gender, marital status, cultural background, educational level). Former smokers were compared with smokers planning to quit regarding structural and sociodemographic factors. Logistic regression was used to assess correlates of stages of change. RESULTS: Smokers planning to quit (prevalence = 19%) reported a more positive attitude, stronger social norms and higher self-efficacy expectations in quitting smoking than smokers not planning to quit (prevalence = 57%). Smokers planning to quit less often were Dutch-born, more often had attended higher vocational schooling or university and more often reported experiencing two or more neighbourhood problems compared to smokers not planning to quit. Former smokers (prevalence = 24%) were older, more often Dutch-born, married, employed and higher educated, compared to smokers planning to quit. Furthermore, former smokers less often reported material deprivation and financial problems than smokers planning to quit. CONCLUSION: Among people living in deprived neighbourhoods, different factors correlate with different stages of change of smoking. Implications for health promotion are discussed.     

转基因食品产业化的风险防范及制度构建

风险防范机制的缺失是阻碍转基因食品产业发展的因素之一。基于转基因食品产业对人类健康、物种进化和生态环境的负面影响，及时有效地构建风险防范机制十分必要。我国既有的转基因食品产业风险防范机制存在诸多缺陷：未形成转基因食品全程跟踪制度及安全事故应急处理制度，在安全性评价制度及法律责任体系等方面也有待进一步完善。     

中医药干预治疗不同程度产后抑郁临床研究

目的 观察中药干预不同程度产后抑郁症患者的临床疗效.方法 选择90例产后抑郁症患者,随机平均分为干预组和对照组,每组中又平均各自分为轻度、中度、重度3组.干预组在基础治疗上加中药干预治疗,对照组只进行基础治疗.结果 两组轻度产后抑郁症患者均100％痊愈;中度产后抑郁症患者,痊愈率和有效率差异无统计学意义(P＞0.05);重度产后抑郁症患者中,干预组的痊愈率和有效率均显著高于对照组(P＜0.05).结论 中药干预重度产后抑郁症患者具有一定的疗效.