脓毒症的免疫损伤

目的观察脓毒症小鼠脾淋巴细胞凋亡情况。方法采用盲肠结扎穿孔术复制小鼠脓毒症模型,30只小鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(CLP组),术后24h取脾组织,行HE染色,观察病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 CLP组脾脏白髓淋巴滤泡内则见大量灶性分布的凋亡淋巴细胞,凋亡的严重程度以凋亡指数(Apoptosis Index,AI)计算,CLP组与Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论脓毒症脾淋巴细胞凋亡明显增加,成为脓毒症免疫抑制的重要机制。     

PA-MSHA对脓毒症大鼠的肺组织炎症反应的影响

目的:探讨铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)对脓毒症致急性肺损伤炎症反应的影响及可能机制。方法:健康SD大鼠120只按随机数字法分为假手术对照组(SC组,n=30)、脓毒症组(CLP组,n=30)、术前治疗组(Pre T组,n=30)和术后治疗组(Pos T组,n=30)。以盲肠结扎穿孔法(CLP)复制大鼠脓毒症模型。制模后12、24、36 h分别采集外周血测定血清细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β)并处死动物,实时RT-PCR方法检测各组肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达;计算肺损伤病理评分;采用流式细胞术检测大鼠外周血单核细胞TLR4阳性率。结果:脓毒症大鼠中Pre T组与CLP组和Pos T组相比,Pre T组血清细胞因子TNF-α、IL-6浓度降低而细胞因子IL-10、TGF-β浓度均高于CLP组和Pos T组(P<0.01)。脓毒症大鼠中Pre T组外周血单核细胞TLR4阳性率和肺组织TLR4 mRNA表达水平低于CLP组和Pos T组(P<0.05),肺组织病理学评分也优于另两组(P<0.01)。结论:术前给予PA-MSHA可以明显下调脓毒症大鼠的炎症反应,从而减轻肺病理损伤程度。     

受体相互作用蛋白140在脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其作用

目的 探讨受体相互作用蛋白140 (receptor interacting protein140,RIP140)在脓毒症急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其在炎症反应过程中的作用.方法 36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组和盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症肺损伤3、6、12、24 h组.HE染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测RIP140在肺组织的表达分布;Western blot及免疫荧光观察肺泡巨噬细胞RIP140的表达变化及定位;RT-qPCR测定肺泡巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平变化.结果 CLP组可见明显肺损伤病理改变且随时间进展逐渐加重.RIP140在脓毒症肺损伤大鼠肺组织中主要表达于炎性渗出细胞,且随时间进展,表达RIP140的细胞数量逐渐增多.CLP术后6h大鼠肺巨噬细胞RIP140蛋白表达水平较正常对照组开始升高(P＜0.05),至12～24 h维持一较高水平,且主要表达于细胞核.CLP术后3h大鼠肺巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平较正常对照组开始升高(P＜0.05),至12～24 h维持一较高水平,下调肺泡巨噬细胞RIP140的表达可明显抑制IL-1 β、TNF-α、IL-6 mRNA的表达.结论 脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞可通过上调RIP140表达增强肺组织炎症反应,从而参与早期急性肺损伤的炎症应答.     

ZLN005通过上调PGC-1α表达诱导巨噬细胞的M2型分化减轻脓毒症引起的急性肺损伤

目的:在脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)中探究小分子化合物ZLN005的作用及相关机制.方法:利用盲肠结扎穿孔(CLP)术建立小鼠脓毒症诱导的急性肺损伤模型,并按处理方式的不同将小鼠分为四组,假手术(Sham)组,ZLN005组、CLP组及CLP+ZLN005组;应用RT-PCR、免疫荧光染色及Western blot...     

穿心莲内酯对脓毒症小鼠的保护作用及机制探讨

目的研究穿心莲内酯对脓毒症小鼠的保护作用及相关机制。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作小鼠脓毒症模型。64只C57BL/6小鼠随机均分为4组:假手术组(sham组)、脓毒症模型组(CLP组)、二甲亚砜组(DMSO组)和穿心莲内酯组(AND组)。各组小鼠于术后1、6、12h腹腔内分别注射相同剂量(0.2mL)的生理盐水、5%DMSO或穿心莲内酯(10mg/kg),记录各组小鼠术后7d生存率并绘制生存曲线。另取48只C57BL/6小鼠,分组及给药方法同前,术后24h分别检测腹腔灌洗液(PLF)中性粒细胞(PMN)数量、外周血及PLF细菌负荷以及外周血炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10水平,同时取小鼠肺脏及肝脏组织进行病理分析。结果与CLP组相比,AND组小鼠术后7d生存率增加(P<0.01),腹腔PMN计数下降(P<0.01),外周血和腹腔细菌清除能力增强(P<0.01),外周血TNF-α、IL-6水平降低,而IL-10水平升高(P<0.01),肺组织和肝脏组织病理损伤程度减轻(P<0.01)。DMSO组与CLP组各项检测指标差异均无统计学意义。结论穿心莲内酯对CLP脓毒症小鼠具有保护作用,可能与其调节免疫功能,增强细菌清除能力以及降低过度炎症反应有关。     

己酮可可碱对大鼠脓毒症急性肺损伤p38MAPK活性的影响

目的　探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对腹腔感染致脓毒症急性肺损伤发挥肺保护作用与p38MAPK活化的关系。方法　采用盲肠结扎穿孔致脓毒症模型,将大鼠随机分为Ⅰ组(Sham组)、Ⅱ组(脓毒症CLP组)、Ⅲ组(脓毒症加西黄著胶CLP+V组)、Ⅳ组(脓毒症加生理盐水CLP+N组)、Ⅴ组(脓毒症加SB203580 CLP+SB组)、Ⅵ组(脓毒症加己酮可可碱CLP+PTX组),其中Ⅲ组、Ⅳ组为溶媒对照组。用Western Blot检测假手术组,脓毒症1,3,6,12,24 h后p38MAPK的磷酸化,然后选择1,6,24 h分别检测应用SB203580或PTX后p38MAPK的表达,同时检测血浆TNF-α、IL-6的含量并观察24 h内肺组织病理改变。结果　与假手术组比较,脓毒症组在各个时间点p38MAPK均有较强的表达,SB203580或PTX预处理后各组的p38MAPK的磷酸化明显受到抑制,且与血浆TNF-α、IL-6的含量以及肺的病理切片变化一致。结论　己酮可可碱可能是通过抑制p38MAPK的磷酸化抑制促炎因子的过度表达,发挥对脓毒症急性肺损伤的保护作用。     

小剂量肝素对脓毒症大鼠早期的干预作用

目的采用大鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,探讨应用小剂量肝素对脓毒症早期的干预作用。方法将72只Wistar大鼠随机分为三组,分别是假手术组(sham)、CLP组(CLP)和肝素组(heparin),每组24只。每组又按6、12、24 h三个时间点分为三个亚组,每亚组8只,分别对三个时间点各亚组大鼠抽血常规检测大鼠血液中血小板、活化部分凝血活酶时间(APTT),用ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,留取肺组织标本做HE染色,观察肺组织病理变化。结果CLP组与假手术组相比,血小板在12 h和24 h明显减少(P<0.01),肝素组在24 h也减少(P<0.01),但较CLP组增多(P<0.01),APTT在24 h时CLP组比假手术组明显延长(P<0.01),肝素组比假手术组也延长(P<0.01),但短于CLP组(P<0.01)。血浆中TNF-α含量各时间点CLP组、肝素组均高于假手术组(P<0.01),但肝素组在12 h和24 h均低于CLP组(P<0.01)。光镜观察肝素组肺组织充血及炎细胞浸润均较CLP组明显减轻。结论肝素能通过对脓毒症凝血-炎症网络的调节,降低血液中TNF-α的含量,从而减轻肺组织炎症损害,早期发挥干预作用,在一定程度上缓解脓毒症的发生发展。     

血必净注射液对脓毒症大鼠Claudin4蛋白和辅助性T淋巴细胞1型表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠肺组织Claudin4蛋白表达的影响。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠100只,体重(250±25)g,随机分入4组,每组25只:假手术组大鼠只开腹、关腹和复苏,不行盲肠结扎穿孔术(CLP);脓毒症组大鼠行CLP;血必净3h组大鼠于CLP后3h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg;血必净12h组大鼠于CLP后12h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg。每组随机留取8只大鼠进行生存率分析。假手术组、脓毒症组、血必净3h组大鼠在术后6、15和24h,血必净12h组大鼠在术后15和24h各随机处死5只,分别留取血液和肺组织标本,测定肺组织湿/干质量比(肺水肿指数),对肺组织进行病理学观察并进行肺损伤病理学评分,测定血清促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平,采用免疫组织化学方法测定肺组织骨架蛋白Claudin4蛋白表达情况,采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞1型(Th1)在外周血单核细胞中的表达情况。结果假手术组、脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠的术后72h存活率分别为8/8、0、1/8和0,血必净3h组显著高于脓毒症组(P<0.01),血必净12h组与脓毒症组的差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠术后各项检测指标均基本不变。脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数,以及术后6、15和24h的肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6、15和24h,以及血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数、肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于血必净3h组同时间点(P值分别<0.05、0.01);脓毒症组与血必净12h组术后同时间点间上述指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。脓毒症组和血必净3h组大鼠术后各时间点的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6和15h的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于血必净3h组同时间点(P值均<0.01),术后24h的外周血单核细胞中Th1的表达率显著低于血必净3h组同时间点(P<0.05)。结论早期使用血必净治疗可以有效地抑制脓毒症大鼠肺组织的炎性反应,减轻肺损伤,提高大鼠存活率,其可能机制与抑制肺组织Claudin4蛋白表达,降低肺泡通透性有关。     

阿托伐他汀对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨阿托伐他汀对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用。方法 60只大鼠随机分为假手术组、脓毒症组和干预组,每组20只。采用盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症大鼠模型,干预组分别于术后6、18 h腹腔注射阿托伐他汀(0.2 mg.kg-1),假手术组和脓毒症组同时间点给予等体积温生理盐水腹腔注射。观察各组大鼠术后20 h肺组织病理学改变、肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平及术后7 d生存率。结果与脓毒症组比较,干预组大鼠术后7 d生存率显著提高,病理示肺损伤明显减轻,肺组织SOD活性显著升高(P<0.01),而MDA水平显著降低(P<0.01)。干预组SOD活性及MDA水平与假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论阿托伐他汀可显著提高脓毒症大鼠的生存率,并可能通过减少肺氧自由基的产生,减轻肺损伤。     

盲肠结扎穿刺大鼠脓毒症模型改良

目的探索更符合临床脓毒症病生理机制的动物模型。方法将75只雄性sD大鼠随机分为CLP组、实验组及假手术组,每组25只,分别行假手术、盲肠结扎穿刺及改良盲肠结扎穿刺术。3组大鼠中各取5只,于术后12h无菌心脏采血2mL,进行细菌培养及鉴定。剩余大鼠分别于术后6h、12h、24h血清TNF—a和IL一6浓度,并观察大鼠死亡率。结果实验组大鼠血培养均为阳性,术后6h、12h、24h血清TNF—a和IL-6浓度均明显高于假手术组及CLP组（P〈0．01）。结论改良盲肠穿刺结扎术所致大鼠脓毒症模型由于传统CLP模型。