| 基于非特异性蛋白酶连续酶解的蛋白质全序列测定方法 |
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| 引用本文： | 杨超,单亦初,张玮杰,戴忠鹏,张丽华,张玉奎.基于非特异性蛋白酶连续酶解的蛋白质全序列测定方法[J].化学学报,2021,79(5):663-669. |
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| 作者姓名： | 杨超 单亦初 张玮杰 戴忠鹏 张丽华 张玉奎 |
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| 作者单位： | 中国科学院大连化学物理研究所 中国科学院分离分析化学重点实验室 大连116023;中国科学院大学 北京100049;中国科学院大连化学物理研究所 中国科学院分离分析化学重点实验室 大连116023 |
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| 基金项目： | 项目受国家重点研发计划课题(2017YFF0205404); 项目受国家重点研发计划课题(2017YFA0505004); 国家自然科学基金(21675153); 国家自然科学基金(21725506) |
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| 摘 要： | 对蛋白质全序列进行测定, 有助于分析蛋白质的结构, 揭示蛋白质的生物学功能. 针对目前基于质谱的蛋白质测序流程中使用特异性蛋白酶酶解产生的肽段种类少、重叠度低、序列拼接困难等问题, 发展了一种基于非特异性蛋白酶连续酶解的蛋白质全序列测定方法. 构建了连续酶解装置, 并使用多种非特异性蛋白酶对蛋白质进行连续酶解. 利用非特异性蛋白酶酶解位点的非特异性、不同的酶解时间以及不同种类蛋白酶酶解产生肽段的互补性, 提高蛋白质酶解肽段的种类和重叠度, 并发展了蛋白质序列拼接算法对液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)和从头测序获得的肽段序列进行拼接. 将此方法应用于牛血清白蛋白和单克隆抗体赫赛汀的全序列测定, 在不考虑亮氨酸和异亮氨酸的情况下, 对牛血清白蛋白和赫赛汀轻链的测序准确度达到100%, 赫赛汀重链的测序准确度为99.7%.
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| 关 键 词： | 非特异性蛋白酶 连续酶解 序列拼接 全序列测定 |
Full-length Protein Sequencing Based on Continuous Digestion Using Non-specific Proteases |
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| Chao Yang,Yi-Chu Shan,Wei-Jie Zhang,Zhong-Peng Dai,Li-Hua Zhang,Yu-Kui Zhang.Full-length Protein Sequencing Based on Continuous Digestion Using Non-specific Proteases[J].Acta Chimica Sinica,2021,79(5):663-669. |
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| Authors: | Chao Yang Yi-Chu Shan Wei-Jie Zhang Zhong-Peng Dai Li-Hua Zhang Yu-Kui Zhang |
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| Affiliation: | a CAS Key Laboratory of Separation Science for Analytical Chemistry, Dalian Institute of Chemical Physics, Dalian 116023, Chinab University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | non-specific protease continuous digestion sequence assembly full-length sequencing |
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