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| 重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达 | |
| 引用本文： | 朱梦瑜,高星杰,钱宝鑫,葛林,赵虹,赵秀娟,杨洁.重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达[J].天津医药,2011,39(11):990-992,1089. |
| 作者姓名： | 朱梦瑜 高星杰 钱宝鑫 葛林 赵虹 赵秀娟 杨洁 |
| 作者单位： | 1. 300070,天津医科大学免疫教研室 2. 300070,天津医科大学基础医学研究中心 3. 300070,天津医科大学生化教研室 4. 300070 天津医科大学生化教研室;300070 天津医科大学基础医学研究中心 |
| 基金项目： | 国家科技部“863”项目(项目编号:2007AA02Z115); 国家自然科学基金资助项目(项目编号:30970582); 天津市应用基础研究计划项目(项目编号:07JCZDJC07300) |
| 摘 要： | 目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain(1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达。 |
| 关 键 词： | 绿色荧光蛋白质类 质粒 基因表达 印迹法 蛋白质 重组融合蛋白质类 限制性内切酶图谱法 |
Construction and Expression of pEGFP-C2-hG3BP-Domain (1-5) Recombinant Eukaryotic Plasmids |
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| ZHU Mengyu,GAO Xingjie,QIAN Baoxin,GE Lin,ZHAO Hong,ZHAO Xiujuan,YANG Jie.Construction and Expression of pEGFP-C2-hG3BP-Domain (1-5) Recombinant Eukaryotic Plasmids[J].Tianjin Medical Journal,2011,39(11):990-992,1089. | |
| Authors: | ZHU Mengyu GAO Xingjie QIAN Baoxin GE Lin ZHAO Hong ZHAO Xiujuan YANG Jie |
| Affiliation: | ZHU Mengyu,GAO Xingjie,QIAN Baoxin,GE Lin,ZHAO Hong,ZHAO Xiujuan,YANG Jie Department of Immunology,Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China |
| Abstract: | Objective:To construct eukaryotic green fluorescent protein (GFP) expressing recombinant plasmids,pEGFP-C2-hG3BP-Domain (1-5),which contain domain (1-5) fragments of human G3BP.Methods:The genes of G3BP fragments were amplified by PCR from the recombinant pEGFP-C1-G3BP plasmid and inserted into pEGFP-C2 fluorescent expressing vector with EcoRI and BamHI sites.These recombinant pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1-5) plasmids were transfected into HeLa cells and the expression of green fluorescent fusion proteins was exa... |
| Keywords: | green fluorescent proteins plasmids gene expression blotting Western recombinant fusion proteins restriction mapping |
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