| 人源性抗食管癌细胞单链抗体的表达纯化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 乔媛媛,熊鸣,瞿秀华,王欲晓,周丽君,张达矜. 人源性抗食管癌细胞单链抗体的表达纯化及活性鉴定[J]. 转化医学杂志, 2018, 7(1): 31-34 |
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| 作者姓名： | 乔媛媛 熊鸣 瞿秀华 王欲晓 周丽君 张达矜 |
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| 作者单位： | 海军总医院基础医学研究中心,海军总医院基础医学研究中心,海军总医院基础医学研究中心,海军总医院基础医学研究中心,海军总医院基础医学研究中心,海军总医院基础医学研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金（31500756） |
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| 摘 要： | 目的研究噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体的功能，对单链抗体进行包涵体表达纯化。方法将从噬菌体抗体库中筛选到的2个单链抗体基因分别连接到pET-28a、pET-SUMO原核表达载体中，分别构建原核表达重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a，将其转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达系统中进行融合表达，对诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）浓度、诱导时间和温度等诱导表达条件进行优化。采用盐酸胍稀释滴定复性方法对抗食管癌肿瘤细胞表面抗原的抗体进行复性，并用SDS-PAGE及质谱技术鉴定表达产物。结果成功构建了重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a，对重组菌株pET-NFC20b、pET NFC70a蛋白表达进行鉴定，诱导条件为0.5 mmol/L IPTG、时间3 h、温度18 ℃，重组蛋白均以包涵体形式表达，经滴定复性后均获得了相对分子量为30 kD和40 kD的重组蛋白。细胞ELISA实验鉴定2种蛋白NFC20b、NFC70a能与KYSE-170、KYSE-150、SMMC7721、A549等细胞结合，具有生物学活性。结论噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体NFC20b和NFC70a，可以成功地构建到pET28a和pET-SUMO载体内进行包涵体表达，纯化后具有蛋白活性，可为后续实验及检测试剂的研发奠定基础。
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| 关 键 词： | 蛋白表达；蛋白纯化；活性鉴定 |
Expression, purification and activity identification of human single chain |
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| QIAO Yuanyuan,XIONG Ming,QU Xiuhu,WANG Yuxiao,ZHOU Lijun and ZHANG Dajin. Expression, purification and activity identification of human single chain[J]. Translational Medicine Journal, 2018, 7(1): 31-34 |
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| Authors: | QIAO Yuanyuan XIONG Ming QU Xiuhu WANG Yuxiao ZHOU Lijun ZHANG Dajin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Protein expression Protein purification Activity identification |
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