Tmem119基因敲入荧光示踪工具小鼠的构建及表型验证 |
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作者姓名: | 梁敏 李青 郭洋 王成稷 陈艳娟 董全全 沈如凌 |
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作者单位: | 1. 上海实验动物研究中心;3. 上海南方模式生物科技股份有限公司 |
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基金项目: | 上海市“科技创新行动计划”实验动物专项课题(2214900101); |
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摘 要: | [目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了Tmem119-tdTomato工具小鼠模型,并对该小鼠进行表型验证。[方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6小鼠受精卵中,通过交配及基因型鉴定获得F1代阳性小鼠;通过荧光检测验证小鼠Tmem119蛋白在大脑各区域的表达情况。[结果]基因型检测结果表明,tdTomato表达片段成功插入到Tmem119基因终止密码子前;免疫荧光检测结果表明,tdTomato蛋白荧光在小胶质细胞内与经典标记蛋白Iba1荧光重叠,与星形胶质细胞标记蛋白GFAP不重叠。[结论]成功构建特异性标记小胶质细胞的红色荧光示踪工具小鼠,为小胶质细胞的动态深入研究提供模式工具。
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关 键 词: | Tmem119 小胶质细胞 CRISPR/Cas9 基因编辑 小鼠模型 |
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