| 摘 要： | 基于口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB/2C,研制快速鉴别口蹄疫自然感染和疫苗接种的ELISA检测试剂盒。诱导表达3AB/2C蛋白,His亲和层析纯化目的蛋白;以纯化的3AB/2C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法,优化ELISA反应条件;标准化ELISA操作规程和试剂盒组分,组装ELISA试剂盒,进行特异性、敏感性、符合率、重复性、血清交叉反应、保存期等性能评价;分离临床牛血清进行应用性检测,评价ELISA试剂盒适用性。结果获得了大小约51 ku可溶性表达3AB/2C蛋白,亲和层析纯化后纯度可达90%以上;确定最适抗原包被浓度为3.25μg/m L,血清稀释度1∶80,封闭液为2%乳清蛋白,封闭条件为37℃1 h 4℃10 h;试剂盒敏感性97.5%、特异性98.3%,批内、批间变异系数分别为3.40%~6.71%和5.20%~8.44%;与3种商品化试剂盒符合率分别为98.90%、98.02%和96.72%;试剂盒4℃条件下保存期可达12个月;1 457份临床样品检测,FMDV感染阳性率6.41%~30.35%。本研究研制的鉴别ELISA试剂盒检测结果可靠、稳定性好,能有效鉴别FMDV自然感染和疫苗免疫,可为FMD综合防控提供技术支撑。
|
