干扰素受体1沉默的人二倍体MRC-5细胞系对水痘-带状疱疹病毒复制的影响 |
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作者姓名: | 杨骁 姜承瀚 孙博 谷铁军 万明明 孙捷 丁雪 王岑嵘 周恩同 姜皓 苏维恒 |
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作者单位: | 1. 吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室;2. 延边大学农学院园艺园林系;3. 吉林大学中日联谊医院手术室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(32170944,32070932,31770184);;吉林省科技发展计划基金(20220402044GH);;内蒙古自治区科技攻关计划(2020GG0233); |
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摘 要: | 目的 通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素(interferon,IFN)相关基因表达水平,以提高水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)在该细胞系中的复制水平,并提高VZV疫苗产量。方法 通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建IFN受体1(interferon receptor 1,IFNAR1)沉默的MRC-5细胞系(MRC-5IFNAR1-)。采用qRT-PCR法检测MRC-5IFNAR1-细胞系IFNAR1 mRNA相对表达量,同时检测VZV感染后IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量,评价基因沉默效果。通过沉默位点的基因测序进一步鉴定基因突变序列。采用qRT-PCR法和空斑形成单位(plaque formation unit,PFU)试验,对比VZV感染后168 h病毒在MRC-5和MRC-5IFNAR1-细胞系中的复制情况,评价MRC-5IFNAR1-细胞系对VZV复制的影响。结果 MRC-5IFNAR1-
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关 键 词: | 水痘-带状疱疹病毒 人二倍体MRC-5细胞 干扰素应答 基因沉默 |
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