外源性SHIP基因表达抑制生长因子介导的K562细胞增殖及Akt磷酸化

【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用，阐明跗，尸对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver．Lv31-FIV和pReceiver．Lv31-SHIP转染K562细胞；转染细胞与IL-3共培养，Westernblot法检测K562细胞Akt磷酸化；观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响：末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver．Lv31-FIV和pReceiver．Lv31-．SHIP转染K562细胞，GFP阳性率为74．6％。野生型s驯P基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用，对照组（K562／FIV）细胞增殖抑制率（3．26％）明显低于转染s删P基因组细胞增殖抑制率（26．42％，P〈0．05）；集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力IL-3作用组K562／SHIP细胞形成集落为60．3±6．6，明显低于IL-3诱导的K562／FIV组（91．7±4．2）]（P〈0．01）。细胞形态观察发现凋亡增加．Westernblot检测发现转染s删P基因组前凋亡酶pro．caspase-3降解增加，TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL．3作用不同时间段（3h，6h，12h），转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱，且Akt磷酸化水平均低于对照组（P〈0．05）。【结论】SHIP基因负调控生长因子（IL-3）介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。