| 重组大肠杆菌产蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其催化合成α-熊果苷 |
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| 引用本文： | 万月佳,马江锋,徐蓉,贺爱永,姜岷,陈可泉,姜引.重组大肠杆菌产蔗糖磷酸化酶的酶学性质及其催化合成α-熊果苷[J].生物工程学报,2012,28(12):1450-1459. |
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| 作者姓名： | 万月佳 马江锋 徐蓉 贺爱永 姜岷 陈可泉 姜引 |
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| 作者单位： | 南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816;南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816;南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816;南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816;南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816;南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816;南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室，江苏 南京 211816 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 21076105)，国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2009CB724701)，江苏高校优势学科建设工程项目资助。 |
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| 摘 要： | 利用重组大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)/pET-SPase发酵生产蔗糖磷酸化酶(EC 2.4.1.7,Sucrose phosphorylase,SPase)。收集的菌体经高压破碎后离心得到粗酶液,通过镍NTA亲和层析、超滤除盐后得到电泳纯的SPase,纯化后的SPase的比酶活是原来的2.1倍,酶活回收率达到82.7%。经SDS-PAGE电泳测定,重组SPase的分子量约为59 kDa。该酶在不高于37℃,pH 6.0~6.7的条件下比较稳定,最适催化温度与最适催化pH分别为37℃,pH 6.7,该酶对蔗糖的米氏常数(Km)为7.3 mmol/L,最大反应速率(Vmax)为0.2μmol/(min.mg)。此外文中还以蔗糖和氢醌为底物,利用重组SPase催化合成α-熊果苷。其最佳反应条件为:20%蔗糖,200 U/mL的酶液,1.6%氢醌,pH 6.0~6.5,25℃,反应21 h。α-熊果苷的摩尔产率为78.3%,α-熊果苷的产量为31 g/L。
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| 关 键 词： | 重组蔗糖磷酸化酶 纯化 酶学性质 α-熊果苷 |
| 收稿时间： | 7/4/2012 12:00:00 AM |
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