miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞， CCK-8检测细胞增殖情况；划痕实验检测细胞迁移能力； Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较，miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调，miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05），但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后，并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059，低于miR-21 mimics组的1.98±0.077，高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）；NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021，高于miR-21 mimics组的0.45±0.020，低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）；NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025，高于miR-21 mimics组的0.38±0.014，低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较， 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）；划痕实验和Transwell实验表明，3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。