| 基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体 |
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| 引用本文： | 孙国平,马驰宇,朱鹏,薛雯,龚蔚蔚,欧明林.基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体[J].实验与检验医学,2020,38(3):470-472,475. |
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| 作者姓名： | 孙国平 马驰宇 朱鹏 薛雯 龚蔚蔚 欧明林 |
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| 作者单位： | 深圳市坪山区人民医院中心实验室,广东 深圳 518118;广西师范大学生命科学学院,广西 桂林 541004;中国人民解放军第九二四医院中心实验室,广西代谢性疾病研究重点实验室,广西 桂林 541002;中国人民解放军第九二四医院中心实验室,广西代谢性疾病研究重点实验室,广西 桂林 541002;中国人民解放军第九二四医院中心实验室,广西代谢性疾病研究重点实验室,广西 桂林 541002;深圳市人民医院临床医学研究中心,广东 深圳 518020 |
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| 基金项目： | 深圳市科技计划;深圳市卫生计生系统科研项目;广西自然科学基金;坪山区卫生系统科研项目 |
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| 摘 要： | 目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养。结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNACRISPR-Cas9。结论基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础。
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| 关 键 词： | 石骨症 CRISPR/Cas9技术 CLCN-7基因 基因编辑载体 |
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