| 人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略 |
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| 引用本文： | 葛彦,陈永井,张学光. 人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略[J]. 苏州大学学报(自然科学版), 2006, 26(6): 911-914 |
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| 作者姓名： | 葛彦 陈永井 张学光 |
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| 作者单位： | 苏州大学生物技术研究所,江苏苏州215007 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划);江苏省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的在人源化抗体构建过程中，采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2／0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA。方法在mRNA抽提时，不用常规的TRIZOL法抽提总RNA，而采用经腹腔培养。生长状态良好的杂交瘤细胞。用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit，将polyA^＋的mRNA富集。可有效减少畸变转录本的含量，提高功能型mRNA的丰度。利用polyA^＋RNA。采用RT-PCR，我们成功地克隆到了轻链可变区序列，序列分析证实读码框完全正确，属于轻链可变区基因。结果NCBI数据库BLAST显示。克隆的基因序列符合小鼠lg可变区特征，具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区。结论采用polyA^＋ mRNA富集技术，成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb（4F1）单克隆抗体的轻链、重链可变区基因，成功地消除了SP2／0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响。
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| 关 键 词： | 畸形转录 假基因 杂交瘤 |
| 文章编号： | 1673-0399(2006)06-0911-04 |
| 收稿时间： | 2005-11-08 |
| 修稿时间： | 2005-11-08 |
A Simple and Rapid Protocol for Cloning of the Functional V Kappa Chain from Aberrant-chain-positive Murine Hybridomas |
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| GE Yan,CHEN Yong-jing,ZHANG Xue-guang. A Simple and Rapid Protocol for Cloning of the Functional V Kappa Chain from Aberrant-chain-positive Murine Hybridomas[J]. Suzhou University Journal of Medical Science, 2006, 26(6): 911-914 |
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| Authors: | GE Yan CHEN Yong-jing ZHANG Xue-guang |
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| Affiliation: | Medical Biotechnology Research Institute of Suzhou University, Jiangsu Suzhou 215007, China |
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