| 剪接因子SRp55原核表达质粒的构建和表达 |
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| 引用本文： | 尹晓敏,施建华,刘飞. 剪接因子SRp55原核表达质粒的构建和表达[J]. 南通医学院学报, 2007, 27(2): 79-82 |
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| 作者姓名： | 尹晓敏 施建华 刘飞 |
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| 作者单位： | 南通大学江苏省神经再生重点实验室,南通,226001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;江苏省自然科学基金;江苏省六大人才高峰基金 |
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| 摘 要： | 目的:本研究通过扩增剪接因子SR蛋白家族的SRp55基因,构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。方法:用PCR法扩增SRp55基因,将扩增产物和载体pGEX-2T进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠,亲和纯化得到纯的GST-SRp55融合蛋白。结果:SRp55基因以正确的阅读框架插入pGEX-2T。IPTG诱导大肠杆菌BL21(DE3)表达,随诱导时间的增加蛋白表达量增高,4h以后接近最高表达量。通过亲和纯化得到分子量在60kD左右的蛋白,经蛋白印迹分析证实为GST-SRp55融合蛋白。结论:成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并获得GST-SRp55融合蛋白,为进一步研究tau蛋白可变剪接机制提供了必要的基础。
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| 关 键 词： | SRp55 Tau 原核表达 剪接因子 |
| 文章编号： | 1000-2057（2007）02-0079-04 |
| 修稿时间： | 2006-12-30 |
Expression of splicing factor SRp55 in E.coli cells |
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| YIN Xiaomin,SHI Jianhua,LIU Fei. Expression of splicing factor SRp55 in E.coli cells[J]. ACTA Academiae Medicinae Nantong, 2007, 27(2): 79-82 |
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| Authors: | YIN Xiaomin SHI Jianhua LIU Fei |
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| Affiliation: | Jiangsu Key Laboratory of Neuroregeneration, Nantong University, Nantong 226001 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SRp55 Tau Prokaryotic expression |
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