| 乙酰肝素酶基因靶向特异性RNA干扰重组表达载体的构建及筛选 |
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| 引用本文： | Liu Y,Huo Q,Xu LW,Jiang ZW. 乙酰肝素酶基因靶向特异性RNA干扰重组表达载体的构建及筛选[J]. 南方医科大学学报, 2010, 30(10): 2340-2, 2346 |
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| 作者姓名： | Liu Y Huo Q Xu LW Jiang ZW |
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| 作者单位： | 蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,安徽,蚌埠,233030 |
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| 基金项目： | 安徽省高等学校省级自然科学研究项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建对人乙酰肝素酶(HPA)基因有特异性抑制作用的短发夹状RNA表达载体.方法 根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆.用脂质体转染人MDA-MB-231细胞,分别以荧光定量PCR、Western blot分析其对HPA在mRNA水平和蛋白质水平上表达的影响.结果 经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功.在构建的5个载体中,HPSE-1组及HPSE-5组中MDA-MB-231细胞HPA基因mRNA和蛋白质表达水平明显下降,而对照组未发生明显改变.结论 成功构建了2个靶向人HPA的shRNA表达载体,转染MDA-MB-231细胞后可高效抑制HPA基因表达,为进一步研究HPA的表达与乳腺癌迁移和侵袭的机制奠定了基础.
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| 关 键 词： | 乙酰肝素酶 RNA干扰 MDA-MB-231细胞 |
Construction and screening of specific short hairpin RNA vector targeting heparanase gene |
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| Liu Yang,Huo Qiang,Xu Li-wei,Jiang Zhi-wen. Construction and screening of specific short hairpin RNA vector targeting heparanase gene[J]. Journal of Southern Medical University, 2010, 30(10): 2340-2, 2346 |
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| Authors: | Liu Yang Huo Qiang Xu Li-wei Jiang Zhi-wen |
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| Affiliation: | School of Pharmacy, Bengbu Medical College, Anhui Engineering Technique Research Center for Biochemical Drugs, Bengbu 233030, China. lhongyu555@163.com |
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| Abstract: | |
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