E2F1对 TFDP3 表达的调控及其对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

目的：构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter，观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法：以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板，PCR扩增TFDP3启动子序列并克隆入荧光素酶报告基因载体，与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA瞬时单独或共同转染PC3细胞，测定荧光素酶活性以观察E2F1对TFDP3启动子的调控作用，Western blotting检测pCMV-E2F1-HA转染对PC3细胞内TFDP3表达的影响，流式细胞术检测TFDP3与E2F1相互作用对前列腺癌细胞凋亡的影响。结果：成功构建TFDP3基因启动子重组质粒pGL3-TFDP3-promoter，与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA共转染PC3细胞后，TFDP3启动子诱导的荧光素酶活性较单独转染pGL3-TFDP3-promoter显著升高（1.14±0.06）vs（0.61±0.05）, P<0.05]。转染pCMV-E2F1-HA的PC3细胞的TFDP3蛋白表达是未转染细胞的2.7倍（0.24±0.03）vs（0.09±0.02）, P<0.05]。pCMV-E2F1-HA转染后PC3细胞凋亡率较未转染组显著上升（7.10±0.003）% vs（2.66±0.001)%，P<0.05]，而pCMV-E2F1-HA与pcDNA3.1-TFDP3共转染后细胞凋亡率较pCMV-E2F1-HA组显著下降（4.92±0.002）% vs（7.10±0.003）%，P<0.05]。结论：E2F1可增强TFDP3启动子的活性，增加TFDP3蛋白的表达，其可能通过此机制抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡。