miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

目的 探究miR-28-5p在LPS诱导的急性肺损伤（acute lung injury，ALI）进程中的功能和分子机制。方法 利用脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导小鼠急性肺损伤3h，6h，12h，取肺组织进行荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-PCR）检测miR-28-5p表达；同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应，RT-PCR检测细胞中miR-28-5p表达；巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激，RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达情况；RT-PCR和蛋白免疫印迹（western blotting，WB）检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）表达水平；Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因，突变结合位点后，并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用。结果 LPS诱导小鼠ALI 3h，6h，12h，肺组织中miR-28-5p的表达水平明显升高（***P＜0.001）；LPS刺激巨噬细胞炎症反应时，细胞内miR-28-5p的表达水平也明显升高（***P＜0.001）；巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后，炎症因子TNF-α（###P＜ 0.001）和IL-1β（&&&P＜0.001）表达水平明显升高；同时抗氧化关键分子Nrf2（###P＜ 0.001）及其下游HO-1（&&&P＜0.001）、NQO1（$$P＜0.01）表达的明显降低；Targetscan 7.0预测发现miR-28-5p靶向Nrf2基因3'' UTR序列，荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-28-5p通过靶向 基因3'' UTR序列调控其转录。结论 miR-28-5p在LPS诱导的ALI中表达上调，并进一步加剧ALI病理进程，其作用机制可能是通过靶向巨噬细胞Nrf2，从而减弱胞内抗氧化能力，促进炎症因子分泌和巨噬细胞的活化。