| 人全长PLCr 1基因真核表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 李秀梅 邓凡 曾位森 华亮 陆地 李明 王宏 刘忠英 罗深秋. 人全长PLCr 1基因真核表达载体的构建及鉴定[J]. 第一军医大学学报, 2004, 24(8): 849-853 |
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| 作者姓名： | 李秀梅 邓凡 曾位森 华亮 陆地 李明 王宏 刘忠英 罗深秋 |
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| 作者单位： | 第一军医大学细胞生物学教研室,广东广州510515 |
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| 摘 要： | 目的构建人全长PLCr1基因真核表达载体，以便进一步研究PLCr1的作用及其机制。方法自行设计一对带有日砌Ⅲ和Not Ⅰ酶切位点的引物，采用RT-PCR技术从MG63细胞中扩增人全长PLCr1 cDNA(3878bp)，纯化后，经HindⅢ-NotⅠ酶切，插入真核表达载体pLNCX2中，构建重组质粒pLNCX2／PLCr1。通过PCR，限制性酶切分析及DNA直接测序对所构建的重组质粒进行鉴定。同时经瞬时转染后，利用RT-PCR及Western blotting转染后LoVo细胞中PLCr1的表达。结果RT-PCR产物经琼脂糖电泳分析所得片段大小与预期相符(3878bp)。重组质粒经日HindⅢ-NotⅠ酶切后，得到3878bp(PLCr1基因)及6100bp(载体pLNCX2)两个片段，同时重组质粒经HindⅢ-BglⅡ酶切后．得到约1300bp及约8500bp两个片段，与预期一致。DNA测序也证实了重组质粒的正确。经RT-PCR和Westem blot分析证实转染pLNCX2／PLCr1的LoVo细胞中PLCr1的表达均高于转染空质粒pLNCX2的LoVo细胞及未转染的LoVo细胞。结论成功构建了人全长PLCr1基因真核表达载体pLNCX2／PLCr1，为进一步研究PLCr1的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | PLCr1基因 真核表达载体 RT-PCR 构建 鉴定 |
Construction and identification of eukaryotic expression vector of human full-length PLCgamma1 gene. |
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| Xiu-mei Li,Fan Deng,Wei-sen Zeng,Liang Hua,Di Lu,Ming Li,Hong Wang,Zhong-ying Liu,Shen-qiu Luo. Construction and identification of eukaryotic expression vector of human full-length PLCgamma1 gene.[J]. Journal of First Military Medical University, 2004, 24(8): 849-853 |
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| Authors: | Xiu-mei Li Fan Deng Wei-sen Zeng Liang Hua Di Lu Ming Li Hong Wang Zhong-ying Liu Shen-qiu Luo |
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| Affiliation: | Department of Cell Biology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China. hlxm1234@hotmail.com |
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