| 实时相对定量反转录PCR检测小鼠阴道黏膜炎症因子的表达 |
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| 引用本文： | 李亮助,杨瑜,袁松华,贲银银,徐建青,张晓燕. 实时相对定量反转录PCR检测小鼠阴道黏膜炎症因子的表达[J]. 中国艾滋病性病, 2011, 0(6): 613-617,625 |
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| 作者姓名： | 李亮助 杨瑜 袁松华 贲银银 徐建青 张晓燕 |
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| 作者单位： | 上海市公共卫生临床中心;复旦大学附属公共卫生临床中心;复旦大学生物医学研究院;复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室;中国疾病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家“十一五”重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治研究项目(2008ZX10001-015-10); 上海市卫生局青年科研项目(2009Y020); 复旦大学青年科学基金(09FQ88); 上海市博士后资助计划面上项目(A类)(10R21410400)资助~~ |
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| 摘 要： | 目的建立实时相对定量反转录聚合酶链反应(real-time RQ RT-PCR)方法,能快速准确地检测各种炎症因子在阴道黏膜的转录表达情况,从而评价包括杀微生物剂在内的生殖道或直肠黏膜用候选药物的刺激毒性。方法以Eppendorf Mastercycler ep realplex实时荧光定量PCR仪为检测平台,选择小鼠β-actin基因为内参,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的real-time PCR检测方法,对白介素2(Interleukin 2,IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、γ干扰素(Interferonγ,IFN-γ)等炎症因子在生殖道黏膜的mRNA转录水平,同时进行检测,并用2-⊿⊿Ct方法计算实验组小鼠目的基因相对于空白组小鼠的表达差异情况。用微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)对结果进行验证。结果使用real-time RQRT-PCR能对小鼠阴道黏膜炎症因子的表达情况进行快速检测,结果与CBA检测结果相吻合。结论该方法快速、灵敏、特异性强、价格低廉、高通量。可用于杀微生物剂等生殖道或直肠黏膜用候选药物的临床前安全性评价工作。
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| 关 键 词： | 实时相对定量反转录聚合酶链式反应 阴道黏膜 炎症因子 安全性评价 |
Determination of the expressions of inflammatory cytokines in mouse vaginal mucosa with real-time relative quantitative RT PCR |
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| LI Liang-zhu,YANG Yu,YUAN Song-hua,et al.. Determination of the expressions of inflammatory cytokines in mouse vaginal mucosa with real-time relative quantitative RT PCR[J]. Chinese JOurnal of Aids & STD, 2011, 0(6): 613-617,625 |
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| Authors: | LI Liang-zhu YANG Yu YUAN Song-hua et al. |
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| Affiliation: | LI Liang-zhu,YANG Yu,YUAN Song-hua,et al.(Shanghai Public Health Clinical Center,Institutes of Biomedical Sciences,Fudan University,Shanghai 201508,China.) |
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