合成嗜热酸性淀粉酶的毕赤酵母表达 |
| |
作者姓名: | 柯涛 熊蓝 张乃群 马向东 惠丰立 牛秋红 杨果 |
| |
作者单位: | 1. 南阳师范学院生命科学与技术学院,河南南阳,473061 2. 湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062 |
| |
基金项目: | 河南省科技攻关计划项目,河南省教育厅自然科学研究计划项目,南阳师范学院校级引进人才专项项目 |
| |
摘 要: | 把密码子优化后的超耐热酸性α-淀粉酶的基因BD5088,引入载体pPIC9K中,将正确构建的重组质粒pPIC9K-BD5088转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,重组超耐热酸性α-淀粉酶PrBD5088在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外。该酶受甲醇的严格调控和诱导,在诱导培养5 d后酶活力达到最大值,表达量可达到约200 mg/L。与原核表达产物ErBD5088相比,PrBD5088的酶学性质发生了一定的改变。其最适反应温度由80℃增加到90℃。最适反应pH值仍为pH5.6,但范围更宽,在pH值5.0~6.5之间,其相对酶活在90%以上,在pH4.0~8.0范围内酶活性保留50%以上。而ErBD5088则只在pH5.0~7.0范围内能维持活性的50%以上。且PrBD5088的温度稳定性远高于ErBD5088。PrBD5088在100℃条件下热处理1 h仍具有80%以上的酶活力,而ErBD5088相同条件下的半衰期只有20 min。此外,Ca2+和Zn2+对维持rBD5088活性和稳定性会产生轻微促进作用,该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。SDS-PAGE测得该酶的分子量为56 ku,高于原核表达的酶蛋白。重组α-淀粉酶PrBD5088不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象。本实验结果表明O-连接糖基化可适当提高PrBD5088的热稳定性、最适温度和酸性pH条件下酶活性。
|
关 键 词: | 超耐热酸性α-淀粉酶 Thermococcus sp. 糖基化 密码子优化 毕赤酵母GS115 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|