冷保存时间对大鼠原位肝移植后移植物诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨大鼠原位肝移植后移植物诱导型一氧化氮合酶基因随冷保存时间的延长而表达的变化。方法:实验于2004-06/2005-06在南京大学医学院附属鼓楼医院医学检验中心科研部完成。雄性SD大鼠120只。受体大鼠根据供肝保存时间的不同随机分为3组。假手术组、保存3h组、保存6h组,每组40只。在术后存活率比较中,每组为10只,超过7d为存活受体。其余受体包括假手术组分别在门静脉复流后1,3,6,12和24h麻醉状态下各处死大鼠6只,自腹主动脉取血检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶。取肝脏肝中叶保存于液氮中作后续肝脏组织内的一氧化氮代谢产物、诱导型一氧化氮合酶活性、诱导型一氧化氮合酶mRNA测定。结果:120只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠生存率:供肝保存时间3h组1周生存率大于6h组[90%(9/10),40%(4/10)]。②术后肝脏功能变化:肝功能自术后复灌开始即有谷丙转氨酶和谷草转氨酶的逐渐升高,在术后12h达到最高值,后逐渐降低,保存6h组转氨酶下降的程度较保存3h组缓慢。③肝脏组织内NO2-和NO3-浓度的变化:肝脏内NO2-和NO3-浓度在术后3h明显增高,在术后12h达到高峰,其中保存6h组明显高于假手术组和保存3h组。④肝组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达:其表达随着冷冻保存时间的延长,逐渐加强,在再灌注后12h表达最明显,其后表达逐渐减弱。保存6h组表达强度及表达持续时间明显强于保存3h组。结论:冷冻保存时间的延长能够促进诱导型一氧化氮合酶的表达,加剧了过氧化亚硝酸盐的形成,导致肝脏保存再灌注损伤的进一步发展,说明诱导型一氧化氮合酶在肝脏保存再灌注损伤中扮演了重要角色。

Influence of cryopreservation time on the expression of graft inducible nitric oxide synthase after orthotopic liver transplantation in rats