Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph在毕赤酵母中的表达及重组酶酶学性质

将Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph进行毕赤酵母密码子优化后,进行全基因合成,并构建了重组酵母菌P.pastoris X33-ppicZalphA-sph,对重组酶进行酶学性质研究。结果表明,重组酶的最适反应温度和最适反应pH为40℃和8.0,且其为20～30℃中保温10 h仍有80%以上的酶活力、在pH7.0～9.0条件下孵育24 h,仍能保持60%以上的酶活性。K~+、Sr~(2+)对酶活有明显激活作用,而Fe~(3+)、Ba~(2+)对酶活有明显抑制作用;重组蛋白酶SPH在极性常数为0.8～3.1的25%的正丁醇、环己烷、二甲苯中孵育6 d后,仍能保留50%以上的酶活性。本研究为B.phaericus 2297和B.phaericus DS11蛋白酶有机溶剂耐受性机制的研究奠定基础。