缺氧微环境下仙连解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制

目的 观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4（Brd4）诱导的核转录因子-κB（NF-κB）信号通路激活的影响，探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法 于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29，给予仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L^-1）干预细胞48 h，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力；采用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）对细胞线粒体膜电位的影响，采用流式细胞术检测结直肠癌细胞HT-29凋亡情况；细胞克隆形成实验及5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EDU）法检测结直肠癌细胞HT-29细胞增殖能力；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Brd4及其下游蛋白如c-核蛋白类基因（c-Myc）、六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1（HEXIM1）的表达水平，同时检测仙连解毒方对NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果 与空白组比较，仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L^-1）组均能抑制结直肠癌细胞HT-29细胞活力（P<0.05，P<0.01），且缺氧培养下细胞半数抑制浓度（IC₅₀）>常氧培养组。与空白组比较，仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）组细胞线粒体膜电位明显下降、细胞凋亡增多（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）组细胞克隆数减少，EDU阳性细胞数减少（P<0.05，P<0.01）。Western blot结果示，与空白组比较，仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）组细胞内Brd4、c-Myc蛋白表达量均有不同程度的下降，HEXIM1表达升高（P<0.05，P<0.01）；磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达下调（P<0.05，P<0.01）。结论 缺氧微环境下仙连解毒方可抑制Brd4调控的结直肠癌细胞HT-29增殖，抑制NF-κB信号通路的激活可能是其机制之一。