| 反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响 |
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| 引用本文： | 刘文滨,王吉耀,杨长青,王逸青,蒋炜,贺伯明,郭津生.反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响[J].中华消化杂志,2004,24(1):7-10. |
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| 作者姓名： | 刘文滨 王吉耀 杨长青 王逸青 蒋炜 贺伯明 郭津生 |
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| 作者单位： | 200032,上海,复旦大学附属中山医院消化科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 ( 39970 339) |
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| 摘 要： | 目的 探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法 双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型。应用巢式RT PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP 1质粒并测序鉴定。应用脂质体介导重组质粒和 pcDNA3空质粒转染HSC ,经含 40 0 μg/mlG418的DMEM培养液筛选 3～ 4周 ,另设立空白对照组。Northernblot和Westernblot检测筛选后的HSC中TIMP 1表达情况 ;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性 ;应用Westernblot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析。结果 外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP 1的表达 ,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果。TIMP 1/GAPDH比值分别为 0 .67,2 .41和 2 .97(mRNA水平 ,P <0 .0 5)。TIMP 1/ β actin比值分别为0 .3 1,0 .98和 1.3 2 (蛋白质水平 ,P <0 .0 5)。外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性 ,酶活性分别为 0 .3 0 49,0 .14 11和 0 .1196(P <0 .0 5)。HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少。Ⅰ型胶原 / β actin比值分别为 0 .63 ,1.78和 1.92 (P <0 .0 5)。Ⅲ型胶原 / β actin比值分别
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| 关 键 词： | 反义金属蛋白酶抑制因子-1 肝星形细胞 胶原 酶灌注法 梯度离心法 基因重组技术 细胞外基质 肝纤维化 |
| 修稿时间： | 2003年1月8日 |
Effects of antisense tissue inhibitor metalloproteinase -1 on hepatic stellate cells |
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| LIU Wen-bin,WANG Ji-yao,YANG Chang-qing,et al..Effects of antisense tissue inhibitor metalloproteinase -1 on hepatic stellate cells[J].Chinese Journal of Digestion,2004,24(1):7-10. |
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| Authors: | LIU Wen-bin WANG Ji-yao YANG Chang-qing |
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| Affiliation: | LIU Wen-bin,WANG Ji-yao,YANG Chang-qing,et al. Division of Gastroenterology,Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai 2 00032,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TIMP-1 |
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