过表达Sirt1对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响?方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMC),利用Sirt1重组慢病毒载体感染细胞获得过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞并分为4组:①NG+LV-CTL组:正常葡萄糖(5.5 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;②HG+ LV-CTL组:高糖(30 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;③NG+LV-Sirt1组:正常葡萄糖+Sirt1慢病毒感染;④HG+LV-Sirt1组:高糖+Sirt1慢病毒感染;再设立3组未感染细胞作为对照,分别为:①NG组(正常葡萄糖);②NM组(正常糖+甘露醇组24.5 mmol/L);③ HG组(高糖处理),培养不同时间后以CCK-8法检测细胞增殖情况;实时定PCR 和Western blot 法检测各组细胞TGF-β1 mRNA 和蛋白表达水平?结果:①通过重组慢病毒感染,嘌呤霉素筛选,获取稳定过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞系;②与NG组相比较,各时间点HG?HG+LV-CTL?HG+LV-Sirt1组CCK8的吸光值均明显升高(P均 < 0.01)?处理24?48 h后,HG+ LV-Sirt1组的吸光值明显低于HG?HG+ LV-CTL组?③与NG组相比较,HG?HG+ LV-CTL?HG+ LV-Sirt1组TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显上调,差异均有显著性(P均 < 0.01);HG+LV-Sirt1组的TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显低于HG?HG+ LV-CTL组(P均 < 0.01);而NG?NM?NG+LV-CTL及NG+LV Sirt1组间相比较,无统计学差异(P > 0.05)?结论:过表达Sirt1能够抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达,Sirt1可能成为防治糖尿病肾病的作用靶点?