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| 合成的寡核苷酸探针用于诊断恶性疟原虫感染的评价 | |
| 作者姓名： | 陶伊文 |
| 摘 要： | 采用简化方法抽提体外培养的FCB1株或NF54株恶性疟原虫基因组DNA,用含0.1%皂苷的氯化钠、柠檬酸钠溶液溶解红细胞,游离的疟原虫用4% sarcosyl和1mg/ml蛋白酶K溶解,获得的原虫DNA经CsCl密度梯度纯化,然后在Tris和EDFA中透析,用分光光度计测定DNA含量。DNA样品印渍于硝酸纤维膜上,用0.5N NaOH降解DNA,硝酸纤维膜经Tris-NaCl溶液洗涤后真空干燥备用。血液标本点于浸湿的硝酸纤维膜上,干后直接在硝酸纤维膜上按上述方法溶解红细胞和疟原虫,然后降解DNA,洗涤后烘干备用。杂交试验的探针为一种末端标记γ-~(82)PAFP的合成的存在于恶性疟原虫基因组中的21个核苷酸重复片断(5'-AGGTCTTAACTTGACTAACAT-3′)。结果表明该同位素标记的寡核苷酸能与微量恶性疟原虫DNA特异地杂交。放射自显影2小时,该探针能检测出1μg的纯化DNA,如果显影过夜,能测出100pg的DNA,而与1μg的人DNA无交叉杂交。对不同感染率的体 |
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