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| 表达猪细小病毒VP2蛋白和猪IL-18重组伪狂犬病毒的构建 | |
| 作者单位： | ;1.河南农业大学牧医工程学院;2.郑州师范学院;3.河南省动物疫病预防控制中心 |
| 摘 要： | 为了获得表达猪细小病毒(PPV)VP2蛋白和细胞因子猪白细胞介素-18(IL-18)的重组猪伪狂犬病毒(PRV)。将PPV VP2基因和猪IL-18基因分别插入到PRV转移质粒PG中,得到重组质粒PG18-VP2。利用脂质体转染法将重组转移质粒PG18-VP2与猪PRV弱毒株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,以EGFP荧光标记,通过5轮蚀斑筛选纯化,成功获得表达PPV VP2蛋白和猪IL-18且带EGFP标记的重组伪狂犬病毒IL18-VP2-rPRV。用重组病毒感染ST细胞,12h后在荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光;通过RT-PCR证实感染细胞中含有PPV VP2和猪IL-18mRNA;Western-blot试验结果显示,重组病毒能表达具有生物活性的PPV VP2蛋白和猪IL-18。重组病毒经连续20次传代后感染细胞仍能发出绿色荧光,PCR检测表明VP2及IL-18基因在重组病毒中能稳定遗传。为进一步研究表达PPV VP2蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病毒的免疫效力奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 猪细小病毒 VP2基因 猪IL-18基因 猪伪狂犬病病毒 重组病毒 |
Construction of recombinant pseudorabies virus co-expressing VP2 from porcine parvovirus and porcine IL-18 |
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