circ_0003159对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制研究

目的探讨circ_0003159对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法选取2015年6月至2018年12月嘉兴市第二医院肿瘤外科经手术切除的30例患者的胃癌组织和配对的癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中circ_0003159、miR-32-5p和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）的表达水平；以及胃癌细胞株（BGC823、AGS、MKN45）和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中circ_0003159的表达水平。选取circ_0003159表达水平最低的胃癌BGC823细胞系，建立circ_0003159超表达模型，设立circ_0003159超表达组（转染circ_0003159模拟物）和阴性对照组（转染空载体阴性对照物）。采用CCK-8法和Transwell小室实验检测circ_0003159超表达对BGC823细胞增殖、侵袭和迁移的影响；生物信息学方法对circ_0003159或miR-32-5p进行靶基因预测，并通过双荧光素酶报告基因验证miR-32-5p与circ_0003159或PTEN的靶向关系；采用Westernblot法检测过表达miR-32-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果胃癌组织中circ_0003159和PTEN的相对表达水平均明显低于癌旁组织（均P＜0.05），但胃癌组织中miR-32-5p的相对表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）。胃癌细胞系BGC823、AGS、MKN45中circ_0003159的相对表达水平均明显低于正常胃黏膜上皮细胞GES-1（均P＜0.05），且BGC823细胞中circ_0003159的相对表达水平最低。相比于阴性对照组，circ_0003159超表达组在48、72h时OD450表达水平均明显下调（均P＜0.05）。与阴性对照组比较，circ_0003159超表达组中细胞侵袭数和迁移数均明显减少（均P＜0.05）。预测结果可知miR-32-5p为circ_0003159潜在的靶基因，PTEN是miR-32-5p潜在的靶基因。荧光素酶报告基因实验结果显示，与对照组比较，过表达miR-32-5p组中circ_0003159-MUT和PTEN-MUT相对活力值比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），而circ_0003159-WT和PTEN-WT相对活力值比较均明显下调（均P＜0.05）。与对照组相比，过表达miR-32-5p组中PTEN蛋白相对表达水平明显下降（P＜0.05）。结论circ_0003159超表达显著抑制了胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力，其机制可能是通过靶向下调miR-32-5p对PTEN的抑制作用。