| 摘 要： | 纳米抗体是一类在生物医药中具有重要应用前景的蛋白药物,然而由于其分子过小极易被清除.为了获得更好的体内代谢,我们通过CD47纳米抗体融合表达白蛋白结合域(ABD),从而提高其体内半衰期.使用分子克隆技术合成构建带有CD47-ABD基因的原核表达载体pET22b-3D3-2-ABD,转入BL21(DE3)中进行表达及Ni~+亲和层析柱纯化,并使用酶联免疫吸附剂(ELISA)法测定其生物学活性.给小鼠尾静脉注射融合蛋白后在不同时间点采血,用双抗体夹心ELISA测定融合蛋白的血浆浓度,并计算药代动力学参数.获得了pET22b-3D3-2-ABD重组质粒,并在BL21(DE3)表达了CD47-ABD融合蛋白.通过Ni~+亲和柱纯化,获得了较高纯度和浓度的CD47-ABD融合蛋白;改造后的CD47-ABD融合蛋白仍保留抗原结合活性,与CD47抗原及人血清白蛋白(HSA)的结合活性均具有剂量依赖性.CD47-ABD融合蛋白的半衰期从改造前的35.82 min延长至了501.52 min.本研究证明了融合ABD能够显著延长CD47纳米抗体体内半衰期而不影响其抗原结合,为解决纳米抗体自身半衰期短的缺点提供了理论和技术参考.
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