MiR-21靶向调控Mfn2对缺血再灌注损伤肾小管上皮NRK-52E细胞自噬及凋亡的影响

摘要 目的：探讨miR-21对缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞自噬及凋亡的影响及其与线粒体融合素2（mitochondria fusion protein mitofusin2，Mfn2）的靶向关系。方法：将大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E细胞按处理方式不同分组：I/R+control mimics组（转染control mimics后缺氧3 h/复氧3 h），I/R+miR-21mimics组（转染miR-21mimics后缺氧3 h/复氧3 h），I/R组（缺氧3 h/复氧3 h）及对照组（正常培养）。选取30只Sprague-Dawley(SD)大鼠，随机分为假手术组、缺血再灌注模型组(I/R组)。取大鼠肾组织进行HE染色，自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr），四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖能力，TUNEL法检测细胞凋亡，实时荧光定量PCR检测细胞自噬和凋亡相关基因LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1、Bcl-2、Bax及Mfn2 mRNA表达，Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达，荧光素酶实验验证miR-21与Mfn2的靶向关系。结果：Sham组大鼠血清BUN、Cr水平，大鼠肾组织细胞凋亡率高于I/R组（P<0.05）。I/R组大鼠肾组织肾小管结构紊乱，大量炎症细胞浸润。Sham组大鼠肾组织miR-21水平高于I/R组（P<0.05）。48 和 72 h 时，I/R+miR-21 mimics组细胞活力明显低于I/R+control mimics组，I/R组及对照组（P<0.05），I/R组细胞活力低于对照组（P<0.05）。I/R+miR-21mimics组凋亡率显著高于I/R+control mimics组，I/R组及对照组（P<0.05），I/R组凋亡率显著高于对照组（P<0.05）。与对照组比较，I/R组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax蛋白及基因mRNA表达量升高，Bcl-2蛋白及基因mRNA表达量降低（P<0.05）；与I/R组比较，I/R+miR-21mimics组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax蛋白及基因mRNA表达量升高，Bcl-2蛋白及基因mRNA表达量降低（P<0.05）。miR-21与Mfn2具有靶向关系。结论：miR-21可靶向Mfn2促进肾缺血再灌注损伤引起的凋亡及自噬。

Effects of miR-21 Targeting Mfn2 on Autophagy and Apoptosis of Renal Tubular Epithelial NRK-52E Cells after Ischemia-reperfusion Injury