埃博拉病毒VP40蛋白的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立北大核心CSCD |
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引用本文: | 盖微微,郑学星,薛向红,冯娜,王化磊,王铁成,赵永坤,黄耕,高玉伟,杨松涛,夏咸柱.埃博拉病毒VP40蛋白的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2013(9):782-786. |
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作者姓名: | 盖微微 郑学星 薛向红 冯娜 王化磊 王铁成 赵永坤 黄耕 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 |
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作者单位: | 1.吉林农业大学动物科技学院130122;2.军事医学科学院军事兽医研究所130122; |
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基金项目: | 农业公益性行业科研专项(No.200903037) |
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摘 要: | 目的以埃博拉病毒(EBOV)VP40基因原核表达产物为抗原建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法。方法在分析EBOV VP40基因稀有密码子(大肠埃希菌系统)的基础上去除5′和3′端稀有密码子,合成VP40基因,构建VP40蛋白原核表达载体pET22b-VP40,并转化至BL21(DE3)菌,在1.0mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原,建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法。结果成功构建重组质粒pET22b(+)-VP40,表达的VP40蛋白经SDS-PAGE鉴定分子质量单位为40ku,与预期值相符;Western blot检测证实VP40重组蛋白能被抗VP40单克隆抗体识别。以该蛋白为包被抗原建立监测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法,其敏感性和特异性均为100%。结论成功构建了pET22b(+)-VP的重组质粒,并诱导表达VP40蛋白。该蛋白具有免疫反应性,以该蛋白为抗原建立的ELISA方法具有较高的特异性和稳定性,可用于埃博拉出血热的诊断和流行病学调查。
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关 键 词: | 埃博拉病毒 原核表达 VP40蛋白 Western btot 间接ELISA |
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