| 单头赤眼蜂DNA提取方法比较及其PCR反应体系优化 |
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| 引用本文： | 柳晓利,董辉,丛斌,张柱亭,江爽.单头赤眼蜂DNA提取方法比较及其PCR反应体系优化[J].沈阳农业大学学报,2011,42(2). |
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| 作者姓名： | 柳晓利 董辉 丛斌 张柱亭 江爽 |
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| 作者单位： | 沈阳农业大学植物保护学院,沈阳,110161 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30871674,30971962); 国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAD0806-01); 辽宁省高校重点实验室支持计划项目(2008S203); 辽宁省教育厅科研项目(L2010488); 沈阳农业大学教师科研基金项目(20091012) |
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| 摘 要： | 为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取中,然后将提取的基因组DNA采用L16(45)正交设计试验,对影响赤眼蜂基因组DNA PCR反应体系的5因素(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、DNA模板、Taq聚合酶)4水平进行筛选。结果表明:CTAB法优于SDS法和Chelex法,且核酸助沉剂的加入明显增强了模板DNA提取效果。同时确立的ITS2的PCR优化反应体系为:总体积为25mL,Mg2+浓度为1.50mM,dNTPs浓度为0.25mM,引物浓度为0.30μM,DNA模板取2.00μL,Taq聚合酶量为2.00U。
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| 关 键 词： | 赤眼蜂 DNA提取 核酸助沉剂 正交设计 PCR体系优化 |
DNA Extraction of Single-head Trichogramma and PCR System Optimization |
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| LIU Xiao-li,DONG Hui,CONG Bin,ZHANG Zhu-ting,GANG Shuang.DNA Extraction of Single-head Trichogramma and PCR System Optimization[J].Journal of Shenyang Agricultural University,2011,42(2). |
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| Authors: | LIU Xiao-li DONG Hui CONG Bin ZHANG Zhu-ting GANG Shuang |
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| Affiliation: | LIU Xiao-li,DONG Hui,CONG Bin*,ZHANG Zhu-ting,GANG Shuang (College of Plant Protection,Shengyang Agricultural University,Shenyang 110161,China) |
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| Abstract: | The CTAB method,SDS method,Chelex method and Acryl Carrier-CTAB method for DNA extraction was compared using single-head Trichogramma,and PCR reaction of the 5 factors(Mg2+,dNTPs,primer,DNA template,Taq polymerase) 4 leveles screening was done using L16(45) orthogonal test for extracted Trichogramma genomic DNA.The results showed that the Acryl Carrier-CTAB method was better than the other three methods,and adding Acryl Carrier could significantly enhanced the effects of DNA extraction.We made orthogonal de... |
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| Keywords: | Trichogramma DNA extraction acryl carrier orthogonal designs PCR system optimization |
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