牛nanog基因原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达 |
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作者姓名: | 郑喜邦 云彦 胡勇策 王华岩 窦忠英 |
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作者单位: | [1]西北农林科技大学国家干细胞工程技术中心陕西分中心,杨凌712100 [2]广西大学动物科技学院,南宁530005 |
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摘 要: | 从6周龄的胎牛(Bos taurus)原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增nanog基因,将其克隆到PMD-18T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上,获得原核表达质粒pGEX-KG-nanog,限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanDg基因编码序列。重组质粒转化大肠杆菌JM109(Escherichia coli),在不同的培养温度(25、30和37℃)和不同浓度的IPTG(0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L)诱导下均获得了表达,结果表明,培养温度和IPTG浓度对GST-Nanog融合蛋白在大肠杆菌中的表达影响甚微;经Western blot检测证实该蛋白约60kD,并具有GST抗原活性,证实目的蛋白为Nanog蛋白。
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关 键 词: | nanog分子克隆 原核表达 牛 |
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