| HPV 16 L1天然变异体在毕赤酵母中的可溶性表达及病毒样颗粒装配 |
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| 引用本文： | 杨旭,黄惟巍,姚宇峰,刘存宝,孙文佳,白红妹,马雁冰.HPV 16 L1天然变异体在毕赤酵母中的可溶性表达及病毒样颗粒装配[J].粉末涂料与涂装,2018(5). |
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| 作者姓名： | 杨旭 黄惟巍 姚宇峰 刘存宝 孙文佳 白红妹 马雁冰 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所;云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心;云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心 |
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| 摘 要： | 目的在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异。方法将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序列M16和Y16分别重组于毕赤酵母表达载体p Pink LC,构建重组表达质粒Y16LC和M16LC,转化表达菌株p Pink strain 1。重组菌经甲醇诱导后,Western blot分析L1蛋白的表达水平及可溶性。经密度梯度离心结合透射电镜观察,分析VLP装配情况。通过软件pubmed在线Alignment分析两个序列的氨基酸排列。结果两个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证明构建正确。两个序列获得了相似的蛋白表达水平,但Y16的可溶性较差,几乎且无VLP形成;而M16呈现较好的蛋白可溶性及VLP装配能力。Y16与M16有5个氨基酸的差异(H202D、T266A、Δ424S、D441Δ、K452Q)。结论 HPV 16 L1氨基酸的微小改变尽管未对重组蛋白的表达水平产生影响,但显著影响有功能的预期产物的获得。提示在基因重组病毒疫苗研发中,制备VLP时需考虑毒株的选择,甚至主动进行抗原的特定氨基酸的改造。
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| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒 主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母 病毒样颗粒 |
Soluble expression of natural mutant of HPV 16 L1 in Pichia pastoris and assembly of virus-like particles |
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