牛病毒性腹泻病毒的体外培养及其多克隆抗体的制备

目的体外培养牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV),并制备其多克隆抗体。方法制备牛肾原代细胞,并进行传代,建立细胞库。将BVD/MD Oregon C24毒种接种至牛肾细胞,进行体外传代,建立BVDV毒种库。按MOI=0.01将BVDV接种至牛肾细胞,制备BVDV病毒液,经Sepharose CL-2B凝胶柱纯化后,分别免疫家兔和健康海蓝白产蛋鸡,制备兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体,ELISA法测定效价。结果牛肾细胞体外传至20代生长状态均良好,传代稳定。建立的BVDV毒种库的毒力达7.50 CCID_(50)/mL,BVDV病毒液毒力达7.00 CCID_(50)/mL以上,纯化后毒力达5.00 CCID_(50)/mL以上。获得的兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体效价分别为1∶12 800和1∶6 400。结论体外成功培养了BVDV,制备的兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体效价较高,为BVDV检测试剂盒的研发奠定了基础。