| NGAL基因3'端序列转录调控元件的克隆与鉴定 |
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| 引用本文： | 丘碧波,许丽艳,邱文冰,黄丽娜,吴梦峰,牛永东,李恩民.NGAL基因3''''端序列转录调控元件的克隆与鉴定[J].中华肿瘤防治杂志,2005,12(1):5-9. |
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| 作者姓名： | 丘碧波 许丽艳 邱文冰 黄丽娜 吴梦峰 牛永东 李恩民 |
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| 作者单位： | 1. 汕头大学医学院,生物化学与分子生物学教研室,广东,汕头,515031
2. 汕头大学医学院,肿瘤病理研究室,广东,汕头,515031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(39900069,30170428,30370641),广东省自然科学基金重点项目(37788),广东省自然科学基金面上项目(990799,010431) |
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| 摘 要： | 目的将不同长度的NGAL基因3'端序列(包括外显子、内含子和部分3'侧翼非翻译序列)克隆到pGL3-Promoter(pGLP)载体中,通过检测报告基因荧光素酶活力,确认NGAL 3'端序列中是否含有增强子或抑制子元件.方法应用PCR技术从SHEEC细胞基因组DNA中扩增出不同长度的NGAL基因片段F5(1 880 bp)和F7(826 bp),将其克隆到pGEM-T easy载体,并测序验证;再亚克隆到pGL3-Promoter载体中,获得pGLP-F5和pGLP-F7表达载体;将pGLP-F5和pGLP-F7载体分别与pRL-TK载体共转染HeLa、EC109和Vero细胞,通过检测相对荧光素酶活力,确认这些NGAL基因片段中是否含有增强子元件.结果我们成功构建了pGLP-F5和pGLP-F7重组载体.Hela、EC109和Vero转染细胞与pGL3-Promoter相比,酶活力未表现出明显的增强或减弱.结论在本研究的实验条件下,NGAL基因F5和F7片段内潜在的顺式作用元件并没有发挥作用,或作用不明显.
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| 关 键 词： | 载体蛋白质类/遗传学 克隆 分子 食管肿瘤/遗传学 食管肿瘤/病理学 基因表达调控 荧光素类 |
| 文章编号： | 1009-4571(2005)01-0005-05 |
| 修稿时间： | 2004年9月7日 |
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