用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体及其功能的研究

目的 用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL—39基因突变体，并比较研究FALL—39及其突变肽的功能。方法 采用PCR体外定点突变技术(PCR—SDM)，设计一对方向相反的引物，其中一个引物引入一个突变点，应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行含FALL—39肽的PGEXAlT质粒的PCR扩增，使FALL—39第24位密码于由CAG变为AAG，将扩增片段自身连接后克隆人工程菌JMl09中表达其突变肽(FALL—39—lys24)，纯化后与FALL—39进行抗菌活性比较。结果 DNA测序结果表明在预期位点发生突变，突变后FALL—39——lys24抗菌活性增强，在抗菌剂量时对红细胞的溶解作用未见明显增加，较大剂量时对红细胞的溶解作用略有增加。结论 用高保真的Polybest DNA多聚酶进行PCR定点突变技术简单、有效，获得一个FALL—39—lys24突变子；其表达分子的抗菌活性明显增强，对红细胞的溶解作用在抗菌剂量时未见明显增加，较大剂量时略有增加，这些结果提示在FALL—39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性，但必须注意避免溶血的副作用。

Construction of a point-directed mutant of human antimicrobial peptide FALL-39 and its functional study