抗Aβ鼠源单克隆抗体的人源化改造及其表达鉴定

目的 将前期构建的抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造，为抗Aβ抗体在临床人体中应用奠定基础。方法 采用模板替换法对已构建的人-鼠嵌合抗体基因中的重、轻链可变区框架区进行人源化改造，构建抗Aβ人源化抗体的真核表达载体。用脂质体法将重、轻链共转染CHO细胞进行表达，采用ELISA法检测表达产物效价、表达量；同时用SDS-PAGE及Western Blot检测表达产物分子量；免疫组化法鉴定其生物活性。结果 重组改造后的抗Aβ人源化抗体基因重链约为1500bp，轻链约为750bp，与预期一致。转染CHO细胞后获得表达，表达量为1.11mg/L，抗体重链相对分子量约为51ku，轻链约为25 ku。ELISA结果显示能与Aβ特异性结合（细胞培养上清A值：2.24），与改造前的嵌合抗体比较效价基本相同。抗体人源化检测显示，只能被羊抗人抗体识别，不能被羊抗鼠抗体识别。免疫组化显示表达产物有结合Aβ抗原的活性。结论 将抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造后，基本保持了原嵌合抗体的生物学特性，为其今后应用于临床提供了可能性。