硫芥诱导小鼠耳郭表皮角质细胞凋亡

目的　利用小鼠耳郭模型研究硫芥对角质细胞增殖动力学的影响 ,以进一步了解表皮干细胞在硫芥皮肤损伤、修复中的作用地位及探索干细胞移植的可行性。方法　固定小鼠后取 5 μL不同浓度(32 ,16 0 ,32 0g·L- 1)硫芥均匀涂抹于耳郭内表面 ,分别于 12 ,2 4 ,4 8,72 ,12 0和 16 8h后急性分离细胞。在无菌条件下取耳郭皮肤组织 ,分离内外侧皮肤 ,小心剥离内侧软骨 ,用胰蛋白酶消化皮肤 ,使表皮与真皮分离 ,进一步用胰蛋白酶消化表皮成单个细胞。采用PI染色流式细胞术观察不同剂量、不同时间细胞的凋亡率 ;PI并Hoechst33342双染活细胞Confocal观察细胞核形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳的方法检测生化改变。结果　 32 0g·L- 1染毒 3h后肉眼可见小鼠耳郭充血、水肿和红斑 ,随着时间的延长还可看到糜烂、化脓、结痂、坏死等变化。 16 0及 32 0g·L- 1不同浓度染毒后在 72h细胞均发生了明显的凋亡 ,并呈现出一定的剂量效应和时间效应关系。凋亡的发生需要一定的时间 ,72h凋亡率达到了峰值 ,并且S期细胞对硫芥尤为敏感。同时Confocal显示细胞核染色质呈高凝集的点状结构、琼脂糖凝胶电泳DNA呈典型的梯型条带。结论　硫芥可引起表皮细胞凋亡 ,促进细胞的终末分化