靶向hTERT的特异性siRNA抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖机制研究 |
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引用本文: | 李海霞,韩晶晶,张云,张振中.靶向hTERT的特异性siRNA抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖机制研究[J].中国药理学通报,2011,27(5):605-609. |
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作者姓名: | 李海霞 韩晶晶 张云 张振中 |
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作者单位: | 郑州大学药学院,河南,郑州,450001 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目 |
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摘 要: | 目的筛选有效抑制肝癌细胞hTERT表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测其对hTERT蛋白表达、细胞凋亡的影响。方法设计并合成针对hTERT的6条siRNA双链及一条阴性对照siRNA,以LipofectaminTM2000转染至肝癌SMMC-7721细胞。用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B法,SRB法)测定干扰后细胞增殖的变化,RT-PCR测定hTERTmRNA的表达,筛选出有效序列。有效序列转染后,进一步采用Western blot法检测hTERT蛋白水平的变化,AnnexinV-FITC/PI双染、流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果以SRB和RT-PCR法筛选出的两条有效siRNA:siRNA-2和siRNA-6,能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,对细胞的抑制率分别为45.3%、38.2%,能高度沉默hTERT mRNA的基因,沉默率分别为80%、75%。二者还能明显下调hTERT蛋白表达(P<0.05),明显增加凋亡,凋亡率分别为20.23%、17.94%。结论 siRNA-2和siRNA-6能特异性沉默肝癌SMMC-7721细胞hTERT基因表达,抑制增殖,降低hTERT蛋白水平,诱导凋亡,为肝癌基因治疗提供了有力的实验依据。
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关 键 词: | siRNA干扰 hTERT基因 肝癌细胞 筛选 细胞增殖 凋亡 |
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