白细胞介素6和肝细胞生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化*

目的：在适宜的诱导条件下，脐血间充质干细胞能够分化为肝样细胞,但其诱导的最佳条件还处于摸索阶段。实验拟验证白细胞介素6和肝细胞生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向肝样细胞分化的可行性,为肝组织工程提供一种新的细胞来源。 方法：实验于2007-03/09在兰州大学第一医院中心实验室进行，实验室属于二级生物实验室。①实验材料：足月孕产妇脐血3份，产妇及家属对实验知情同意，并实验经医院伦理委员会批准。②实验方法：采用密度梯度离心法联合贴壁筛选法获脐血间充质干细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面分子。选取培养第3代的脐血间充质干细胞,分4组培养：含有肝细胞生长因子培养基组、含白细胞介素6培养基组、含肝细胞生长因子+白细胞介素6培养基组、不加生长因子的低糖DMEM培养基对照组。③实验评估：应用显微摄像和四甲基偶氮唑盐观察细胞增殖及生长特征，应用流式细胞仪、免疫组织化学法鉴定细胞表型,采用酶联免疫吸附法检测培养上清液中清蛋白水平。 结果：①从脐血获得的间充质干细胞生长良好，诱导培养后的细胞均可在21~28 d时，形态变为三角形、多角型或类圆形。②诱导后7 d检测到了甲胎蛋白抗体的表达，诱导21，28 d时检测见CK18阳性，诱导分化的间充质干细胞以时间依赖方式产生清蛋白。肝细胞生长因子+白细胞介素6诱导组肝系细胞标志阳性细胞率均高于单独细胞因子诱导组（P < 0.05）。无细胞因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标。 结论：肝细胞生长因子、白细胞介素6均能诱导脐血间充质干细胞分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞，两者联合效果更佳。

Hepatocyte growth factor in combination with interleukin-6 to induce the in vitro differentiation of mesenchymal stem cells isolated from human umbilical cord blood into hepatocyte-like cells