| 铜绿微囊藻生物钟蛋白的表达纯化与抗体制备 |
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| 引用本文： | 罗志勇,徐虹,章军,杨秀娜,王立红.铜绿微囊藻生物钟蛋白的表达纯化与抗体制备[J].高技术通讯,2006,16(7):725-729. |
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| 作者姓名： | 罗志勇 徐虹 章军 杨秀娜 王立红 |
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| 作者单位： | 厦门大学生命科学学院,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,厦门,361005 |
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| 摘 要： | 为了获得融合表达的铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)生物钟蛋白KaiA、KaiB、KaiC并制备其相应的多克隆抗体,将kaiA、kaiB、kaiC基因分别克隆到原核表达质粒pET-His中.重组质粒pET-His-KaiA,pET-His-KaiB和pET-His-KaiC经酶切和测序鉴定后,分别转化E.coli BL21(DE3)进行融合表达.经SDS-PAGE分析可知,融合表达的KaiA、KaiB和KaiC蛋白表达量可分别达到菌体总蛋白的25%、40%和20%.经亲和层析后融合蛋白KaiA和KaiB的纯度分别达95%和92%,而KaiC经胶回收纯化后纯度也可达93%.将纯化后的三种Kai蛋白作为抗原分别免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA检测抗体滴度表明,制备的抗KaiA、抗KaiB和抗KaiC的多克隆抗体效价高,分别可达到1:50000、1:60000和1:100000.Western blotting结果表明:获得的多克隆抗体具有较高的效价,抗体能识别相应的Kai蛋白,具有较高的特异性,能用于铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiA、KaiB和KaiC的表达节律检测.
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| 关 键 词： | 铜绿微囊藻 生物钟蛋白 多克隆抗体 酶联免疫吸附 免疫印迹 |
| 收稿时间： | 2005-10-25 |
| 修稿时间： | 2005年10月25 |
Expression, purification and antibody preparation of biological clock proteins in Microcystic aeruginosa |
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| Luo Zhiyong,Xu Hong,Zhang Jun,Yang Xiuna,Wang Lihong.Expression, purification and antibody preparation of biological clock proteins in Microcystic aeruginosa[J].High Technology Letters,2006,16(7):725-729. |
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| Authors: | Luo Zhiyong Xu Hong Zhang Jun Yang Xiuna Wang Lihong |
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| Affiliation: | The Key laboratory of Education Ministry for Cell Biology and Tumor Cell Engineering, School of Life Sciences, Xiamen University, Xiamen 361005 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Microcystic aeruginosa biological clock protein polyclonal antibody ELISA Western blotting |
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