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| 尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定 | |
| 引用本文： | 吴伟立,李彦英,苗林,徐金森,方宏清,陈惠鹏.尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定[J].军事医学科学院院刊,2005,29(2):124-126,131. |
| 作者姓名： | 吴伟立 李彦英 苗林 徐金森 方宏清 陈惠鹏 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071;厦门大学肿瘤细胞教育部重点实验室,厦门,361005 2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 3. 厦门大学肿瘤细胞教育部重点实验室,厦门,361005 |
| 基金项目： | 军事医学科学院科技创新启动基金资助 |
| 摘 要： | 目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。 |
| 关 键 词： | 尿酸氧化酶 重组蛋白质类 大肠杆菌 共价交联 聚合酶链反应 |
| 文章编号： | 1000-5501(2005)02-0124-04 |
Expression and purification of urate oxidase and identification of its bioactive type |
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| WU Wei-li,LI Yan-ying,MIAO Lin,XU Jin-Sen,FANG Hong-qing,CHEN Hui-peng.Expression and purification of urate oxidase and identification of its bioactive type[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2005,29(2):124-126,131. | |
| Authors: | WU Wei-li LI Yan-ying MIAO Lin XU Jin-Sen FANG Hong-qing CHEN Hui-peng |
| Affiliation: | WU Wei-Li 1,2,LI Yan-Ying 1,MIAO Lin 1,XU Jin-Sen 2,FANG Hong-Qing 1*,CHEN Hui-Peng 1* |
| Abstract: | |
| Keywords: | urate oxidase recombinant proteins Escherichia coli covalent cross-linking polymerase chain reaction |
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