缓激肽对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化的影响

目的　制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)的上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）细胞模型，研究缓激肽（bradykinin，BK）对视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞发生EMT的影响，并探讨BK对PVR的影响机制。方法　体外培养人RPE细胞株ARPE-19细胞，采用不同浓度转化生长因子-β1（transforming growth factor- β1，TGF- β1）分别作用于ARPE-19细胞24 h、48 h，于倒置显微镜下观察细胞形态变化；采用CCK-8检测细胞增殖情况，确定TGF-β1浓度及作用时间；利用Western blot和细胞免疫荧光检测EMT标志蛋白E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）和波形蛋白（Viminten）表达情况；细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移能力。同时采用Western blot检测TGF/Smad通路下游pSmad3和Smad7的表达。结果　TGF- β1刺激ARPE-19细胞后可以成功诱导EMT体外细胞模型。当TGF-β1浓度为10 μg·L^-1、作用时间为48 h时，细胞增殖最明显。BK在TGF- β1诱导的EMT中可以降低α-SMA、Viminten的表达，升高E-钙黏素的表达并且降低细胞迁移能力。这些影响能被BK-2受体拮抗剂HOE-140逆转。TGF-β1诱导ARPE-19细胞发生EMT时，pSmad3表达量升高；TGF-β1刺激前给予BK刺激，pSmad3表达量减少；加入BK前预敷HOE-140，然后给予TGF-β1刺激，BK作用减弱，pSmad3表达量升高。Smad7表达趋势与pSmad3表达趋势相反。结论　10 μg·L^-1 TGF-β1可导致ARPE-19细胞发生EMT。BK通过TGF-/Smad信号通路上调Smad 7的表达、下调pSmad 3的表达，从而逆转TGF-β1诱导的EMT。提示BK可能是一种新的、有效的治疗PVR的方法。