| p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测 |
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| 引用本文： | 徐祥,梁华平,刘昕,代佳平,刘琛,罗艳,王正国.p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测[J].第三军医大学学报,2003,25(2):123-126. |
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| 作者姓名： | 徐祥 梁华平 刘昕 代佳平 刘琛 罗艳 王正国 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学,附属大坪医院野战外科研究所第一研究室,重庆,400042
2. 第三军医大学,基础医学部分子遗传学教研室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划资助项目 (“973”项目 ) (G19990 54 2 0 3)，国家自然科学基金资助项目 ( 30 0 80 0 0 9)，重庆市科委基金资助项
目 ( 2 0 0 0 6 319) |
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| 摘 要： | 目的：获得NF－κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因，并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法：利用引物二聚体搭桥技术，扩增p65亚基DNA结合域基因片段，并将基克隆入酵母双杂交载体pG-BKT7 DNA-BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109，在SD／Trp选择培养基上培养，观察转化株的生长情况。按尿素／SDS法抽提酵母蛋白，用SDS－PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株β－半乳糖苷酶的活性。结果：获得p65 DNA结合域基因片段，并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达，对酵母细胞无毒性作用，无自身激活活性。结论：NF－κB p65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因，用于肽库筛选，捕捉与之相互作用的多肽。
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| 关 键 词： | p65 DNA结合域 克隆 核因子κB 酵母双杂交 自身激活作用 酵母表达 炎症反应 |
| 文章编号： | 1000-5404(2003)02-0123-04 |
| 修稿时间： | 2001年1月5日 |
Cloning and expression of NF-κB p65 subunit DNA binding domain and detection of its self-activation in the yeast two-hybrid system |
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| XU Xiang,LIANG Hua ping,LIU Xin,DAI Jia ping,LIU Chen,LUO Yan,WANG Zheng guo.Cloning and expression of NF-κB p65 subunit DNA binding domain and detection of its self-activation in the yeast two-hybrid system[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2003,25(2):123-126. |
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| Authors: | XU Xiang LIANG Hua ping LIU Xin DAI Jia ping LIU Chen LUO Yan WANG Zheng guo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | p65 |
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