站台水环境应激对神经内分泌和胸腺细胞凋亡的影响及加味逍遥丸的调节作用

目的：探讨小站台水环境对小鼠血清糖皮质激素水平、胸腺5-羟色胺含量的变化及胸腺细胞的破坏、凋亡的影响,以及加味逍遥丸调节作用.方法：实验于2003-03/12在江西中医学院附属医院临床检验中心完成.选择10月龄昆明种小鼠,随机分为14组：应激72 h组;应激72 h给药组;应激48 h组;应激48 h给药组;应激24 h组;应激24 h给药组;应激12 h组;应激12 h给药组;应激8 h组;应激8 h给药组;应激4 h组;应激4 h给药组;正常对照组;正常对照给药组.每组10只.利用小站台水环境诱发慢性持续性应激模型,观察不同应激时间小鼠站台前后胸腺质量及组织指数、血清糖皮质激素含量、胸腺5-羟色胺含量、胸腺细胞凋亡状况,以及加味逍遥丸在不同时间不同层次的调节作用.结果：参加实验小鼠140只,全部进入结果分析.①胸腺质量和脾质量：应激24 h,48 h,72 h组均比对照组显著降低（P＜0.001或P＜0.01）;应激72 h给药组与相对应应激组相比显著升高（71.34&;#177;10.52）,（57.75&;#177;9.17）g,P＜0.01];（70.28&;#177;9.05）,（58.75&;#177;7.72）g,P＜0.01];应激48 h给药组脾质量与相对应应激组相比也显著升高（75.51&;#177;5.05）,（64.75&;#177;6.22）,P＜0.01].②胸腺指数和脾指数：应激48 h、72 h组小鼠显著低于对照组（P＜0.001或P＜0.01）.应激72 h给药组与相对应应激组相比增高（3.02&;#177;0.42）,（2.21&;#177;0.42）,P＜0.01];（2.97&;#177;0.12）,（2.36&;#177;0.34）,P＜0.01].③小鼠血清糖皮质激素含量：应激12 h,24h,48 h,72 h组与对照组相比明显提高（P＜0.001或P＜0.01）,应激72 h给药组与应激72 h组相比显著降低（19.16&;#177;5.06）,（23.29&;#177;4.64）g/L,P＜0.01].④小鼠胸腺组织、脾组织5-羟色胺含量：应激8 h,12 h,24h,48 h,72 h组胸腺5-羟色胺含量比对照组显著提高（（P＜0.001或P＜0.05）;应激48 h,72h组脾组织5-羟色胺含量比对照组显著提高（P＜0.001或P＜0.01）,应激72 h给药组与相对应激组相比有所降低（2.15&;#177;0.31）,（2.91&;#177;0.25）μg/g,P＜0.001];（6.05&;#177;2.08）,（7.96&;#177;1.70）μg/g,P＜0.05].⑤荧光显微镜观察TFAR19蛋白（绿色荧光）出现百分率：应激4 h,8 h,12 h,24 h,48 h组高于对照组（P＜0.001或P＜0.05）,并在应激12 h组达最高峰.应激72h组反而下降.应激72 h给药组与应激72 h组有所提高（9.15&;#177;4.34）,（4.20&;#177;7.71）%,P＜0.05].⑥Annexin-V凋亡蛋白（绿色荧光）出现的百分数：通过异硫氰酸和碘化吡啶的定染作用,检测不同应激时间Annexin-V胸腺细胞凋亡的变化,凋亡细胞染成绿色,死亡细胞和凋亡晚期细胞染成红色.应激8 h、12 h24h、48 h、72 h组显著高于对照组（P＜0.001或P＜0.05）.应激72 h给药组比应激72 h组降低（42.65&;#177;8.76）,（55.95&;#177;10.75）%,P＜0.01].⑦流式细胞仪检测TFAR19蛋白平均荧光度值：应激4 h,8 h,12 h,24 h,48 h,72 h组高于对照组,应激12 h组达最高峰.应激72 h给药组显著低于相对应应激组（6.87&;#177;3.01）,（9.28&;#177;3.47）,P＜0.05].⑧流式细胞仪检测Annexin-V单阳性细胞和双阳性细胞：应激8 h,12 h,24 h,48 h,72 h组比对照组增多.应激72 h给药组Annexin-V与相对应应激组相比有所降低（17.61&;#177;1.31）,（19.42&;#177;1.62）%,P＜0.01]. 结论：随应激时间的加长,小鼠胸腺组织的5-羟色胺,血清糖皮质激素含量、Annexin-V调亡蛋白出现的百分率逐渐升高,胸腺指数逐渐下降.应激12 h组TFAR19凋亡相关蛋白出现百分率达高峰.应激通过神经内分泌网络影响胸腺组织,并对免疫系统起作用,可促进胸腺细胞产生TFAR19凋亡相关蛋白,从而加速胸腺细胞的凋亡.加味逍遥丸可调节应激对胸腺的损伤而起到保护作用.

Effect of platform-over-water stress on neuroendocrine internal secretion and thymus apoptosis and the regulative role of Jiawei Xiaoyao pill