| 水稻YTB中OSVDAC5蛋白的原核表达与抗体制备 |
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| 引用本文： | 秦圣光,程钢,刘学群,郭锐进,周杰,王春台. 水稻YTB中OSVDAC5蛋白的原核表达与抗体制备[J]. 生物技术, 2011, 21(4). DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.04.093 |
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| 作者姓名： | 秦圣光 程钢 刘学群 郭锐进 周杰 王春台 |
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| 作者单位： | 中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室,湖北武汉,430074 |
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| 基金项目： | 国家自然基金项目，中南民族大学科学研究基金项目 |
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| 摘 要： | 目的:克隆水稻YTB osvdac5基因,原核表达后获得纯化的OSVDAC5蛋白,制备相应的抗体.方法:采用Trizol法提取水稻总mRNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增得到该基因与原核表达载体连接,构建重组质粒pET-30a-osvdac5,并转入大肠杆菌进行原核表达,SDS-PAGE检测表达产物.通过镍柱纯化获得的单一目的蛋白用于抗体制备,用Western Blot检测抗体的特异性.结果:克隆到原核表达载体中osvdac5基因的ORF为813 bp,编码271个氨基酸.在大肠杆菌中15℃、0.7mmol/L的IPTG浓度诱导17 h是pET-30a-osvdac5融合蛋白表达的优选条件,表达的OSVDAC5蛋白属于包涵体蛋白.镍柱纯化后的OSVDAC5为30 kD左右的单一条带.Western Blot分析表明,抗体能够与30 kD处的OSVDAC5蛋白进行特异性结合.结论:成功克隆了水稻YTB osvdac5基因,原核表达蛋白OSVDAC5制备的多免隆抗体具有一定特异性,能与免疫抗原结合,这为进一步研究OSVDAC5蛋白在植物不同生长发育时期中的表达模式奠定了基础.
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| 关 键 词： | 水稻 VDAC 克隆 原核表达 抗体 |
Protokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of OSVDAC5 Protein in Rice YTB |
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| QIN Sheng-guang,CHENG Gang,LIU Xue-qun,GUO Rui-jing,ZHOU Jie,WANG Chun-tai. Protokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of OSVDAC5 Protein in Rice YTB[J]. Biotechnology, 2011, 21(4). DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.04.093 |
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| Authors: | QIN Sheng-guang CHENG Gang LIU Xue-qun GUO Rui-jing ZHOU Jie WANG Chun-tai |
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| Affiliation: | QIN Sheng-guang,CHENG Gang,LIU Xue-qun,GUO Rui-jing,ZHOU Jie,WANG Chun-tai(Key Lab for Biotechnology of the State Ethnic Affairs Commission,College of Life Science,South-Central University for Nationalities,Wuhan 430074,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rice VDAC cloning protokaryotic expression polyclonal antibody |
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