| 狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 郭冰峰,张少宁,安文琪,梁雪爽,张静静,马小伟.狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备[J].粉末涂料与涂装,2019(2). |
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| 作者姓名： | 郭冰峰 张少宁 安文琪 梁雪爽 张静静 马小伟 |
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| 作者单位： | 华兰生物工程股份有限公司 |
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| 摘 要： | 目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 狂犬病病毒 基质蛋白 密码子优化 原核表达 亲和层析 多克隆抗体 |
Codon optimization and prokaryotic expression of matrix protein of rabies virus CTN-1 strain and preparation of its polyclonal antibody |
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