| 应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞中PAI-1 mRNA表达 |
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| 引用本文： | 何淑芳,杨林,黄维娟,杨雁,周伏圣,方巧云,张安平,杨森,张学军.应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞中PAI-1 mRNA表达[J].中国药理学通报,2009,25(1). |
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| 作者姓名： | 何淑芳 杨林 黄维娟 杨雁 周伏圣 方巧云 张安平 杨森 张学军 |
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| 作者单位： | 1. 安徽医科大学临床药理研究所
2. 安徽医科大学临床药理研究所;安徽医科大学皮肤病研究所、安徽医科大学第一附属医院皮肤性病科;教育部"重要遗传病基因资源利用"重点实验室,省部共建,安徽,合肥,230032
3. 安徽医科大学皮肤病研究所、安徽医科大学第一附属医院皮肤性病科;教育部"重要遗传病基因资源利用"重点实验室,省部共建,安徽,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 中国博士后科学基金，教育部留学回国人员科研启动基金，安徽省教育厅自然科学基金重点项目，安徽医科大学校人才基金 |
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| 摘 要： | 目的 应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)中纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1,PAl-1)mRNA的表达.方法 体外分离培养KFs,应用不同浓度(1.25～20 pmol·L-1)TGF·β1刺激KFs 3 h或TGF-β1(10 pmol·L-1)刺激KFs不同时间(0.5～6 h),采用SYBR Green I荧光实时定量RT-PCR法检测,以β-actin基因作为内参,计算各组PAI-1 mRNA的相对表达量.结果 与空白对照组相比,TGF-β1能明显诱导KFs中PAI-1 mRNA的表达,10、20pmol·L-1浓度组表达比值分别增至4.19及4.44倍(P<0.01);TGF-β1(10 pmol·L-1)的1、2 h时间组表达比值分别增至2.29及2.41倍(P<0.05),3、6 h时间组分别增至4.19及5.83倍(P<0.01).提示,TGF-β1诱导KFs中PAl-1mRNA表达的最适浓度为10 pmol·L-1、最适时间为3 h.结论 利用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β1诱导KFs中PAI-1 mRNA的表达,为进一步研究瘢痕疙瘩中TGF-β1信号通路的靶基因调控机制,以及开发治疗瘢痕疙瘩的新药提供了基础.
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| 关 键 词： | 瘢痕疙瘩 转化生长因子-β1 纤溶酶原激活物抑制剂-1 荧光实时定量RT-PCR |
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